Method Article

Transplantation von Fettgewebe-Derived Stem Cell Blatt, Leckage nach teilweiser Colectomy in einem Rattenmodell zu reduzieren

DOI:

10.3791/57213

⸱

August 11th, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Clinical Sciences of Companion Animals, Faculty of Veterinary Medicine, Utrecht University, 2Department of Otorhinolaryngology, Erasmus MC University Medical Center, 3Department of Clinical Sciences and Public Health, Faculty of Veterinary Science, Mahidol University, 4Department of Surgery, Erasmus MC University Medical Center, 5Department of Orthopaedics, Erasmus MC University Medical Center, 6Hill's Pet Nutrition Inc.

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Vorbereitung und die Transplantation von abgeleitet Fettgewebe Stammzellen (ASC) Blätter auf unzureichend genähten kolorektalen Anastomosen in einem Rattenmodell wird vorgestellt. Diese neuartige Anwendung zeigt, dass ASC Blätter kolorektalen Anastomose Leckage reduziert werden können.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anastomosen Leckage ist eine katastrophale Komplikation nach Kolorektale Chirurgie. Obwohl aktuelle Methoden zur Leckage Prävention unterschiedlicher klinischer Wirksamkeit haben, sind sie bis jetzt unvollkommene Lösungen. Stammzell-Therapie mit ASC Sheets könnte eine Lösung für dieses Problem bieten. ASC gelten als aussichtsreiche Kandidaten für die Förderung der Gewebe, die Heilung aufgrund ihrer trophischen und immunmodulatorische Eigenschaften. Hier bieten wir Methoden, um High-Density-ASC Blätter zu produzieren, die auf einem kolorektalen Anastomose in einem Rattenmodell der Leckage reduzieren verpflanzt werden. ASC gebildet Zelle Blätter in Thermo-responsive Kultur-Gerichte, die leicht abgestellt werden können. Am Tag der Transplantation erfolgte eine teilweise Colectomy mit einem 5-Naht kolorektalen Anastomose. Tiere wurden sofort mit 1 ASC Blatt pro Ratte transplantiert. ASC Blätter eingehalten spontan die Anastomose ohne Klebstoff, Naht oder irgendwelche Biomaterial. Tiergruppen wurden geopfert, 3 bis 7 Tagen nach der Operation. Im Vergleich zu transplantierten Tieren, lag die Inzidenz von Anastomosen Abszesse und Leckage in Kontrolltieren. In unserem Modell war die Transplantation von ASC Blätter nach kolorektalen Anastomose erfolgreich und mit einer geringeren Leckrate verbunden.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Partielle Colectomy mit eine primäre Anastomose ist eine häufig durchgeführte Operation, die für viele Erkrankungen des Dickdarms wie Darmkrebs, Morbus Crohn und Divertikulitis1,2getan werden kann. Die am meisten gefürchtete Komplikation nach kolorektalen Anastomose Anastomosen Leckage3ist. Obwohl mehrere Risikofaktoren im Zusammenhang mit Anastomosen Lecks identifiziert wurden, sind Lösungen zur Vermeidung von Leckagen Unkown4,5.

Fettgewebe gewonnenen Stromazellen Zellen (ASC) werden entzündungshemme....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Subkutane abdominalen Fettgewebe erhielt von menschlichen Spendern mit Genehmigung der medizinischen Ethik-Ausschuß (#MEC-2014-092), Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Niederlande. Alle Tierversuche stimmten mit den ethischen Komitees der Tier experimentieren, Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Niederlande (133-14-01).

1. menschliche ASCs Isolation und Kultur

  1. Bereiten Sie 3 mL Isolierung Medium für 1 g des Fettgewebes. Niedrige Glukose Mischung Dulbecco's geändert Eagle Medium (LG-DMEM) mit 10 g/L Bovine Serum Albumin (BSA) und 1 g/L Kollagenase Typ 1.
  2. Sezieren menschlicher subkutane abdominal....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ein Flussdiagramm der Studie Darstellung ASC Blatt Kultur und das Verfahren der Kolon-Resektion und Anastomose ist in Abbildung 1dargestellt. Abbildung 2 zeigt ASC Blatt mikroskopische Morphologie und das makroskopische Erscheinungsbild der ASC-Blatt während und nach der Ablösung. Abbildung 3 zeigt die verschiedenen Stufen des ASC Blatt ablösen und Transplantation. Abbildung 4

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anastomosen Leckage ist die am meisten Schwerwiegendes unerwünschtes Ereignis nach Kolon-Resektion mit eine primäre Anastomose. Optimale Techniken zur Vermeidung von Anastomosen Störung und Leckage fehlen noch. Lokale Anwendung eines Arrays von Biomaterialien wurde mit unterschiedlichen Ergebnisse25,26,27durchgeführt. Zelltherapien soll Gewebereparatur von Gewebeersatz oder die Stimulation der lokalen Heilung durch Parakrine Sek.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Autoren erklären, dass die Forschung in Ermangelung jeder kommerziellen oder finanziellen Beziehung geführt wurde, die als ein potenzieller Interessenkonflikt ausgelegt werden könnte.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Autoren sind dankbar, dass Prof. Dr. S.E.R Hovius, Dr. M.A.M. Mureau und alle Chirurgen der Abteilung für plastische Chirurgie für die Sammlung des subkutanen Fettgewebes. P. Sukho wird durch einen Zuschuss aus den Niederlanden Fellowship-Programm (NFP-12/435), während der Durchführung der Studie unterstützt. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens wird unterstützt durch Zuschüsse aus niederländischen Arthritis Foundation (LP11).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
LG DMEMGibco, Life Technologies22320022ASC-Isolierung und -Kultur
Kollagenase Typ IGibco, Life Technologies17100-01ASC-Isolierung
RinderserumalbuminSigma-AldrichA9418ASC-Isolierung
Fötales RinderserumGibco, Life Technologies10270-106FBS, ASC-Isolierung und Kultur
3% Essigsäure Säure mit MethylenblauStemcell Technologies7060ASC Isolierung
GentamicinGibco, Life Technologies15750-037ASC Isolierung und Kultur
Ampothericin BGibco, Life Technologies15290-018ASC Isolierung und Kultur
Schüttler (Gallenkamp Environmental Shaker Modell 10X 400)Akribis ScientificF240ASC Isolierung
ZentrifugeHettichlabRotina380ASC-Isolierung und -Kultur
Phosphatpuffer KochsalzlösungGibco, Life Technologies14190-094PBS, ASC-Isolierung und -Kultur
Ascorbinsäure-2-phosphatSigma-AldrichA8960ASC-Isolierung und -Kultur
Humaner rekombinanter Fibroblasten-Wachstumsfaktor 2AbD SerotecAF-100-15FGF2, ASC-Isolierung und -Kultur
Trypsin EDTAGibco, Life Technologies25200-056ASC-Kultur
DimethylsulfoxidSigma-AldrichD2650-5xDMSO, ASC Gefrieren
Thermo-responsive KulturschalenNunc Thermo wissenschaftliche174904ASC-Blattvorbereitung
Nicht resorbierbare geflochtene Seide 4/0B Braun21151042Chirurgie
Nicht resorbierbares Monofilament Polyamid 8/0B BraunG1118170die
Chirurgie Resorbierbare geflochtene Polyglykolsäure 5/0B BraunC1048207die Chirurgie

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kawahara, H., et al. Single-incision laparoscopic right colectomy for recurrent Crohn's disease. Hepatogastroenterology. 57 (102-103), 1170-1172 (2010).
  2. Saia, M., Buja, A., Mantoan, D., Agresta, F., Baldo, V. Colon Cancer Surger....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Adipose Tissue Stem CellsASC Sheet TransplantationPartial ColectomyColorectal AnastomosisRat ModelThermo responsive Culture DishesCell Sheet DetachmentAnastomotic Leakage PreventionStromal Vascular Fraction IsolationHemocytometer Cell Counting

Related Articles