Ein Modell der Aortenklappenstenose eines Kaninchens, das durch eine direkte Ballonverletzung induziert wird
Summary
Ein geeignetes Tiermodell ist erforderlich, um die pathologischen Mechanismen, die der Aortenklappenstenose (AVS) zugrunde liegen, zu verstehen und die Wirksamkeit therapeutischer Interventionen zu bewerten. Das vorliegende Protokoll beschreibt ein neues Verfahren zur Entwicklung des AVS-Kaninchenmodells über eine direkte Ballonverletzung in vivo.
Abstract
Tiermodelle entwickeln sich zu einem wichtigen Instrument, um die pathologischen Mechanismen zu verstehen, die der Aortenklappenstenose (AVS) zugrunde liegen, da es keinen Zugang zu zuverlässigen Quellen für erkrankte menschliche Aortenklappen gibt. Unter den verschiedenen Tiermodellen sind AVS-Kaninchenmodelle eines der am häufigsten verwendeten in Großtierstudien. Herkömmliche AVS-Kaninchenmodelle erfordern jedoch eine langfristige Zeit der Nahrungsergänzung und genetischen Manipulation, um eine signifikante Stenose in der Aortenklappe zu induzieren, was ihre Verwendung in experimentellen Studien einschränkt. Um diesen Einschränkungen zu begegnen, wird ein neues AVS-Kaninchenmodell vorgeschlagen, bei dem die Stenose durch eine direkte Ballonverletzung der Aortenklappe induziert wird. Das vorliegende Protokoll beschreibt eine erfolgreiche Technik zur Induktion von AVS bei neuseeländischen weißen Kaninchen (NZW) mit Schritt-für-Schritt-Verfahren für die Vorbereitung, den chirurgischen Eingriff und die postoperative Versorgung. Dieses einfache und reproduzierbare Modell bietet einen vielversprechenden Ansatz für die Untersuchung der Initiierung und des Fortschreitens von AVS und stellt ein wertvolles Werkzeug zur Untersuchung der zugrunde liegenden pathologischen Mechanismen der Krankheit dar.
Introduction
Es wird zunehmend erkannt, dass die Verwendung geeigneter Tiermodelle zu einem besseren Verständnis der pathologischen Mechanismen beitragen kann, die der Aortenklappenstenose (AVS) zugrunde liegen, da der Zugang zu zuverlässigen Quellen für erkrankte menschliche Aortenklappen, die mit dem Fortschreiten der Aortenklappenstenose (AS) verbunden sind, fehlt. Unter den verschiedenen Tiermodellen zur Untersuchung von AVS sind Kaninchen eines der am häufigsten verwendeten AVS-Modelle für Großtiere, und das AVS-Kaninchenmodell wird entweder durch eine Cholesterin-/Vitamin-D2-Supplementierung oder eine genetische Manipulation induziert 1,2,3,4.
Obwohl Kaninchen-AVS-Modelle einen signifikanten Einblick in die Entwicklung und den Verlauf von AVS gegeben haben, bleibt es immer noch eine Herausforderung, AVS konsistent und reproduzierbar zu induzieren, wie in unseren vorläufigen Experimenten zu sehen war.
Zusätzlich zu diätinduzierten und genetisch anfälligen Tiermodellen wurde ein neues Modell des AVS durch direkte mechanische Verletzung bei Mäusen etabliert 5,6. Das mechanische Verletzungsmodell induziert erfolgreich eine Aortenklappenstenose und stellt ein einfaches und reproduzierbares AVS-Modell in Wildtyp-Mäusen dar. Nach unserem Kenntnisstand gibt es bisher keine Studien, die die Auswirkungen einer mechanischen Verletzung auf die Aortenklappe in Kaninchenmodellen untersucht haben. Somit bietet diese Studie ein neues Verfahren zur Induktion von AVS bei männlichen neuseeländischen weißen Kaninchen durch eine direkte Ballonverletzung der Aortenklappe, die den Zustand einer Aortenklappenklappenstenose genau nachahmen kann. Dieses Protokoll enthält Schritt-für-Schritt-Beschreibungen der Vorbereitung, des chirurgischen Eingriffs und der postoperativen Versorgung, die für die Induktion reproduzierbarer AVS-Kaninchenmodelle nützlich sind.
Protocol
Representative Results
Discussion
Tierische AVS-Modelle werden häufig verwendet, um die pathologischen Aspekte von AVS zu untersuchen, einschließlich der Initiierung und des Fortschreitens von AVS. Dieses Protokoll führt ein neues AVS-Modell für Kaninchen ein, das durch eine direkte Ballonverletzung der Aortenklappe induziert wird. In dieser Studie zeigte das Aortenklappenverletzungsmodell eine signifikante Verdickung und Verkalkung der Segel. Im Vergleich zum milden AVS-Modell, das durch Nahrungsergänzung induziert wurde, wurde die Aortenklappe im …
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch einen Zuschuss der National Research Foundation of Korea (NRF) unterstützt, der von der koreanischen Regierung (MSIT) (Nr. 2020R1A4A3079570), dem Bildungsministerium (Nr. 2021R1I1A1A01051425) und dem Industrial Strategic Technology Development Program (Nr. 20014873) des Ministeriums für Handel, Industrie und Energie der Republik Korea finanziert wird.
Materials
| 3-0 Silk suture | AILEE | SK312 | |
| 4% paraformaldehyde(PFA) | Intron | IBS-BP031-2 | |
| Alizarin red Solution | Millpore | TMS-008-C | |
| ASAHI SION BLUE | ASAHI | Guide wire | |
| Back Table Cover | Yuhan kimberly | 80101-30 | |
| Balloon In-deflation Device | Demax Medical | DID30s | |
| Bionet Veterinary monitor | BIONET | BM3 VET | |
| C-Arm | SIEMENS Healthcare GmbH | Cios alpha | |
| Certified Rabbit Diet | Purina | 5322 | 4.7% Hydrogenated Coconut Oil, 0.5% Cholesterol, & 1% Molasse |
| Curadle Smart Incubator | Autoelex | CS-CV206 | Intensive Care Unit (ICU) |
| Ergocalciferol | Sigma-aldrich | E5750 | Vitamin D2 |
| Fechtner conjunctiva forceps titanium | WORLD PRECISSION Instrument | WP1820 | |
| Forceps | HEBU | HB203 | |
| Gentamicin | Shin Poong | ||
| Glycopyrrolate | SamChunDang | ||
| Greenflex NS | DAI HAN PHARM | Normal saline 500 mL | |
| Hematoxylin solution | Sigma-aldrich | HT1079-1 SET | |
| Heparin | JW pharmaceutical | 25,000 U | |
| Infusion set for single use | SWOON MEDICAL | ||
| Iodine | Green pharmaceutical | ||
| Iodixanol | GE Healthcare | Visipaque | Inflation solution (contrast agent) |
| IV catheter 22 G | BD | 382423 | |
| IV catheter 24 G | BD | 382412 | |
| Ketoprofen | SamChunDang | ||
| Luer-Lok syringe 10 mL | Becton Dickinson Medical | ||
| Luer-Lok syringe 3 mL | Becton Dickinson Medical | ||
| Microscope | OLYMPUS | SZ61 | |
| Microtome | ThermoFisher Scientific | HM 325 | |
| MT stain kit | Sigma-aldrich | HT15-1kt | |
| Needel holder | Solco | 009-1304 | |
| Needle Holder with Lock and Suture | JEUNGDO BIO & PLANT | H-1222-18 | |
| Paraffin | LK LABKOREA | H06-660-107 | |
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Potassium chloride 40 | Daihan Pharm | KCl | |
| Prelude Ideal Hydrophilic Sheath | MERIT MEDICAL | PID4F11018SS | Sheath 4F |
| PTA Balloon Dilatation catheter | Boston Scientific | H749-3903280208-0 | Balloon catheter 8.0 mm |
| Rompun | Elanco | Xylaxine | |
| sterile Gauze | DAE HAN Medical | 10 cm x 20 cm | |
| Surgical Gloves | Ansell | Ansell | |
| Surgical Gown | Yuhan kimberly | 90002-02 | |
| Surgical Scissors | Nopa, Germany | AC020/16 | |
| Surgical Tape | 3M micopore | 1530-1 | |
| Syringe 1 mL | Shin Chang Medical | ||
| Syringe 10 mL | Shin Chang Medical | ||
| Tissue cassette | Scilav korea | Cas3003 | |
| Transducer gel | SUNGHEUNG | SH102 | |
| Tridol | Yuhan Corp. | Tramadol HCl | |
| Ultrasound system | Philps | Affiniti 50 | |
| Von Kossa stain kit | Abcam | ab105689 | |
| Zoletil 50 | Virbac korea | Tiletamine & zolazepam |
Referenzen
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