جيل من نخاع عظام الفئران الخلايا الجذعية المشتقة للاستخدام في 2 الفوتون التصوير
Summary
العرض مستضد في الأجهزة اللمفاوية الثانوية من قبل خلايا الجذعية هو أمر حاسم لبدء بوساطة الخلايا التائية الاستجابة المناعية التكيفية. نحن هنا لشرح ثقافة نخاع العظم الخلايا الجذعية المستمدة الفئران ، التنشيط ، ووضع العلامات لمدة 2 الفوتون التصوير.
Abstract
يمكن العثور على العديد من الطرق لتحضير الخلايا الجذعية في الفئران الأدب. هنا ، نقدم طريقة التي تنتج CD11c عالية أكبر من 85 ٪ في الخلايا الجذعية الثقافة التي يعيش في العقدة الليمفاوية تجفيف بعد الحقن تحت الجلد وهذا المستضد للخلايا T مستضد معين (انظر الفيديو). بالإضافة إلى ذلك ، ونحن نستخدم الآلات ايسن Incucyte لتعقب الخلايا الجذعية النضج ، حيث ، في يوم 10 ، مورفولوجيا الخلايا المستزرعة هي الحال في خلية الجذعية الناضجة و<85 ٪ من الخلايا CD11chigh. كشفت دراسة العرض مستضد في الغدد الليمفاوية الطرفية بنسبة 2 الفوتون التصوير أن هناك ثلاث مراحل متميزة من الخلايا الجذعية والتفاعل خلية T 1 و 2. المرحلة الأولى تتكون من الاتصالات بين الخلايا وجيزة المسلسل مستضد تي متحركة محددة للغاية ويحمل مستضد الخلايا الجذعية 1 و 2. تتميز المرحلة الثانية من خلال اتصالات طويلة بين المستضد محددة الخلايا التائية والخلايا الجذعية تحمل المستضد 1 و 2. أخيرا ، تتميز المرحلة الثالثة من قبل خلايا تي من فصل الخلايا الجذعية ، واستعادة القدرة على الحركة وبداية لتقسيم 1 و 2. هذا مثال واحد من هذا النوع من التفاعلات محددة مستضد التي يمكن تحليلها من قبل اثنين من الفوتون التصوير من مستضد محملة الخلايا خلية الصبغة التي تحمل علامات تعقب شجيري.
Protocol
Discussion
الخلايا الجذعية هي الوسطاء الرئيسيين للاستجابة المناعية التكيفية والخلية مستضد الأكثر كفاءة تقديم تتسم حتى الآن. طرق الإنسان والثقافة الماوس الخلية الجذعية في الأدب تختلف في نوع من السيتوكينات استخدامها للتأثير على تطوير أنواع مختلفة من الخلايا الجذعية. خصوصا ، وتستخدم GM – CSF …
Acknowledgements
المعاهد الوطنية للصحة الزمالة زمالة Kirchstein predoctoral AI – 64128 (MPM) ، GM – 41514 (MDC) ، GM – 48071 (IP)
Referenzen
- Miller, M. J., Safrina, O., Parker, I., Cahalan, M. D. Imaging the single cell dynamics of CD4+ T cell activation by dendritic cells in lymph nodes. J Exp Med. 200, 847-856 (2004).
- Henrickson, S. E., et al. T cell sensing of antigen dose governs interactive behavior with dendritic cells and sets a threshold for T cell activation. Nat Immunol. 9, 282-291 (2008).
- Jefford, M., et al. Functional comparison of DCs generated in vivo with Flt3 ligand or in vitro from blood monocytes: differential regulation of function by specific classes of physiologic stimuli. Blood. 102, 1753-1763 (2003).
- Inaba, K., et al. Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. J Exp Med. 176, 1693-1702 (1992).
- Lutz, M. B., et al. Differential functions of IL-4 receptor types I and II for dendritic cell maturation and IL-12 production and their dependency on GM-CSF. J Immunol. 169, 3574-3580 (2002).
- Xu, Y., Zhan, Y., Lew, A. M., Naik, S. H., Kershaw, M. H. Differential development of murine dendritic cells by GM-CSF versus Flt3 ligand has implications for inflammation and trafficking. J Immunol. 179, 7577-7584 (2007).
- Inaba, K., Swiggard, W. J., Steinman, R. M., Romani, N., Schuler, G. Isolation of dendritic cells. Curr Protoc Immunol. 3, (2001).
- Winzler, C., et al. Maturation stages of mouse dendritic cells in growth factor-dependent long-term cultures. J Exp Med. 185, 317-328 (1997).
- Koch, F., et al. Tumor necrosis factor alpha maintains the viability of murine epidermal Langerhans cells in culture, but in contrast to granulocyte/macrophage colony-stimulating factor, without inducing their functional maturation. J Exp Med. 171, 159-171 (1990).
- Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
- Wei, S. H., et al. Ca2+ signals in CD4+ T cells during early contacts with antigen-bearing dendritic cells in lymph node. J Immunol. 179, 1586-1594 (2007).
- Castellino, F., et al. Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction. Nature. 440, 890-895 (2006).
