Summary

2光子イメージングで使用するための骨髄由来マウス樹状細胞の世代

Published: July 09, 2008
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Summary

樹状細胞による二次リンパ器官における抗原提示がT細胞媒介免疫応答の開始に重要です。ここでは、マウス樹状細胞を骨髄由来の文化、活性化、および2光子イメージングのための標識を示す。

Abstract

マウス樹状細胞の調製のためのいくつかの方法が文献で見つけることができます。ここで、我々は文化の中では85%以上のCD11c高樹状細胞を生成する手法を提案することを皮下注射し、抗原特異的T細胞(ビデオを参照)に存在する抗原を後に流入領域リンパ節へのホーム。さらに、我々は、10日目に、培養細胞の形態は、成熟樹状細胞の典型的であり、細胞の<85%がCD11chighである、樹状細胞の成熟を、追跡するためにエッセン楽器Incucyteを使用してください。 2光子イメージングによる末梢リンパ節における抗原提示の研究では、樹状細胞とT細胞の相互作用1、2の3つのフェーズが存在することを明らかにした。フェーズIは、樹状細胞1、2を運ぶ非常に運動性の抗原特異的T細胞と抗原との間の短いシリアル接点で構成されています。第二段階は、樹状細胞1、2をもつ抗原特異的T細胞と抗原との間の長期にわたる接触によってマークされます。最後に、第III相は、運動性を回復し、1、2を分割し始めて、樹状細胞から切り離すT細胞によって特徴付けられる。これは、抗原負荷細胞トラッカー色素標識樹状細胞の二光子励起イメージングによって解析することができる抗原特異的相互作用のタイプの一例です。

Protocol

1)1つのマウスから、両方の大腿骨の骨を削除します。 筋肉を切り取ると、関節の上下の大腿骨(膝と腰を)公開する解剖鋏を使用してください。解剖ピンセットで大腿骨の中央をつかみ、可能な限りそのまま骨端を残すために、上記と関節の下にカット。 小さな解剖鋏を使用して、できるだけ多くの筋肉のように拭き取ります。 RPMIの皿に大腿骨を移す。 全ての手順?…

Discussion

樹状細胞は適応免疫応答と日付に特徴づけられる最も効率的な抗原提示細胞の主要なメディエーターである。文学におけるヒトとマウスの樹状細胞培養のための方法は異なる樹状細胞型の開発に影響を与えるために使用されるサイトカインの種類が異なります。特に、GM – CSF、flt3L、IL4、IL13、TNF -αとIFN -γは、成熟未成熟、炎症性および定常状態の試験管3-7に樹状細胞由来のマウス骨髄のように生成?…

Acknowledgements

健康Kirchsteinフェローシップ博士号を取得する前のフェローシップAI – 64128(MPM)、GM – 41514(MDC)、GM – 48071(IP)の国立研究所

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Diesen Artikel zitieren
P. Matheu, M., Sen, D., Cahalan, M. D., Parker, I. Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging. J. Vis. Exp. (17), e773, doi:10.3791/773 (2008).

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