视网膜水平切片制备

Summary

传统的垂直切片和视网膜的整个安装准备视网膜电路的功能已被用来研究。在这里，我们描述了新的切割方法，保存完整的视网膜神经细胞的树突状形态。

Abstract

传统的垂直切片和视网膜的整个安装准备视网膜电路的功能已被用来研究。然而，许多视网膜神经细胞，如无长突细胞，，扩大自己的树突水平，从而使细胞的形态，应该是在垂直切片受到严重损坏。在整个安装准备，尤其是对于膜片钳记录，在中间层的视网膜神经细胞由于覆盖范围广的神经胶质细胞（穆勒细胞）小号endfeets，不容易接触。在这里，我们描述了新的切割方法，保存完整的视网膜神经细胞的树突状形态。使用vibratome切片视网膜内层片水平后视网膜嵌入在低温熔化琼脂糖凝胶。视网膜水平切片准备在此，我们研究了视网膜神经细胞的功能，它们的形态相比，通过使用膜片钳记录，钙成像技术，免疫细胞化学，单细胞RT – PCR检测。

Protocol

准备琼脂块（30毫克/毫升，即3％，蒸馏水）。溶解和微波先倒入一个玻璃盘。在冰箱中保持在摄氏4度的菜 提示：琼脂块应提前做好准备。 准备低的温度熔化琼脂糖凝胶（25毫克/毫升，即2.5％，在中等）。解散，微波它。保持在35 摄氏度的热水澡 提示：保持琼脂糖凝胶不会太热。如果实在太热，它需要很长一段时间，待凝固，凝胶可以杀死视网膜…

Discussion

有几个重要的优点是视网膜的水平切片准备。

首先，扩大树突如无长突细胞和水平细胞水平，细胞的形态，被保存下来。它已被证明有超过20种无长突细胞在视网膜（麦克尼尔和Masland，1998年），所以它是很重要的，比较细胞的形态与生理属性。

第二，在整个安装视网膜的神经胶质细胞endfeets的广泛覆盖，防止补丁移液器无长突细胞的访问。在横向切片，无长突细胞的胞体接触片表面。

第三，化?…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Agar		Sigma	A-1296
Agarose L		Wako	317-01182	Low-temperature melting agarose
Hyaluronidase		Sigma		Type I-S, 300 units/mg
Medium				in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames’ Solution (Sigma)
Microwave
Hot water bath				35 C
Vibratome slicer		Leica	VT1000S
MF-Membrane filters		Millipore	HAWP01300	Filter paper , pore size 0.45 um
Dissection tools				forceps, blade, pinch, twizzer, etc.
Instant glue				eg., Alonalpha, Krazy Glu
50 ml syringe
syringe filter		Millipore	SX0001300