Counting Nervenstammzellen
Summary
Die Kenntnis der genauen Anzahl der lebensfähigen Zellen ist für viele Gewebekultur Manipulationen erforderlich. Dieses Protokoll beschreibt, wie man zwischen lebenden und toten Zellen zu unterscheiden und zu quantifizieren Zellen unter Verwendung eines Hämozytometers. Obwohl es das Zählen menschliche neurale Stammzellen / Vorläuferzellen (hNSPCs) beschreibt, kann es für andere Zelltypen verwendet werden.
Abstract
Die Kenntnis der genauen Anzahl der lebensfähigen Zellen in einem bestimmten Volumen einer Zellsuspension ist für viele Routine Gewebekultur Manipulationen, wie Plattieren Zellen für Immunzytochemie oder für Zell-Transfektionen erforderlich. Dieses Protokoll beschreibt eine einfache und schnelle Methode zur Unterscheidung zwischen lebenden und toten Zellen und die Quantifizierung der Zellkonzentration und insgesamt Zellzahl unter Verwendung eines Hämozytometers. Dieses Verfahren erfordert zunächst Ablösung von Zellen aus einem Wachstum Oberfläche und Resuspendieren sie in den Medien. Anschließend werden die Zellen in eine Lösung von Trypanblau (im Idealfall bis zu einer Konzentration, die 20-50 Zellen pro Quadrant geben wird) verdünnt und in die Hämazytometer. Schließlich, im Durchschnitt der Grafen von lebensfähigen Zellen in mehreren zufällig ausgewählten Quadranten, indem die durchschnittlich um das Volumen eines 1 mm 2-Quadranten (0,1 ul) und Multiplikation mit dem Verdünnungsfaktor ergibt die Anzahl der Zellen pro l. Multipliziert man diese Zellkonzentration durch das Gesamtvolumen in ul gibt die Gesamtzahl der Zellzahl. Dieses Protokoll beschreibt das Zählen menschliche neurale Stammzellen / Vorläuferzellen (hNSPCs), kann aber auch für viele andere Zelltypen verwendet werden.
Protocol
Discussion
Dieses Protokoll beschreibt eine einfache und schnelle Weg, um die Zellkonzentration für eine Vielzahl von Experimenten mit Zellen zu bestimmen. Mit der Verknüpfung in 3d beschrieben, kann man schnell und genau zu bestimmen, die Zellkonzentration und insgesamt Zellzahl in einem bestimmten Volumen.
Acknowledgements
Die Autoren bedanken sich bei Dr. Philip H. Schwartz des National Human Neural Stem Cell Ressourcen auf die Kinder s Hospital, Orange County Forschungsinstitut für die Bereitstellung hNSPC Kulturen anzuerkennen.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
Referencias
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
