Подсчет правам нервные стволовые клетки
Summary
Знание точного числа жизнеспособных клеток требуется для многих манипуляций культуры ткани. Этот протокол описывает, как различать живых и мертвых клеток и клеток с использованием количественно hemacytometer. Хотя она описывает подсчета человека нейронных стволовых / клеток-предшественников (hNSPCs), он может быть использован для других типов клеток.
Abstract
Знание точного количества жизнеспособных клеток в данном объеме суспензии клеток требуется для многих рутинных манипуляций культуры тканей, таких как покрытие клеток для иммуноцитохимии или для сотовых трансфекции. Этот протокол описывает простой и быстрый метод для разграничения живых и мертвых клеток и количественной концентрации клеток и общее количество клеток с использованием hemacytometer. Эта процедура требует, прежде всего отсоединение клетки от поверхности роста и суспендирования их в средствах массовой информации. Затем клетки разводят в решении Трипановый синий (в идеале до концентрации, что даст 20-50 клеток на квадрант) и помещен в hemacytometer. Наконец, в среднем насчитывает жизнеспособных клеток в нескольких случайно выбранных секторах, разделив среднем на объем не менее одного 1 мм 2 квадранта (0,1 мкл) и умножения на коэффициент разбавления дает число клеток в л Умножив это концентрации клеток на общий объем в мкл дает общее число клеток. Этот протокол описывает подсчета человека нейронных стволовых / клеток-предшественников (hNSPCs), но также может быть использован и для многих других типов клеток.
Protocol
Discussion
Этот протокол описывает простой и быстрый способ определения концентрации клеток для различных экспериментов с клетками. Использование контекстного описано в 3d, можно быстро и точно определить концентрацию клеток и общего числа клеток в данном объеме.
Acknowledgements
Авторы хотели бы выразить признательность д-р Филип Х. Шварца о человеческом нейронных стволовых клеток ресурсов в Детской больнице с, Orange County научно-исследовательский институт для обеспечения hNSPC культур.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
Referencias
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
