Оценка функции сосудов у больных с хронической болезнью почек

Summary

Степень сосудистой дисфункции и способствуя физиологические механизмы могут быть оценены у пациентов с хроническим заболеванием почек, измеряя плечевой потока опосредованного расширение артерии, аорты скорости распространения пульсовой волны, а выражение эндотелия сосудов белка клетки.

Abstract

Пациенты с хроническим заболеванием почек (ХБП) значительно увеличили риск сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) по сравнению с населением в целом, и это лишь частично объясняется традиционными факторами риска ССЗ. Сосудистая дисфункция является важным нетрадиционные фактором риска, характеризуется сосудистой дисфункции эндотелия (чаще всего оценивается как нарушения эндотелий-зависимой дилатации [EDD]) и ужесточение крупных упругих артерий. Хотя существуют различные методы для оценки EDD и большой жесткости эластичной артерии, наиболее часто используемый в плечевой поток-опосредованной дилатации артерии (FMD _BA) и аортальный скорость пульсовой волны (aPWV), соответственно. Оба этих неинвазивных мер сосудистой дисфункции являются независимыми прогностическими факторами будущих сердечно-сосудистых событий у пациентов с и без заболевания почек. Пациенты с ХБП продемонстрировать как нарушение ящуром _{бакалавра,} и увеличение aPWV. Хотя точные механизмы, по которым сосудистая дисфункция развиLOPS в CKD не полностью понял, увеличилось окислительный стресс и последующее снижение оксида азота (NO) биодоступность вносят важный вклад. Клеточные изменения в окислительном стрессе может быть оценена путем сбора сосудистых эндотелиальных клеток из локтевой вены и измерения экспрессии белка маркеров окислительного стресса с помощью иммунофлюоресценции. Мы предоставляем здесь обсуждение этих методов для измерения ящуром _BA, aPWV и выражение эндотелия сосудов белка клетки.

Introduction

Хроническая болезнь почек (ХБП) является серьезной проблемой общественного здравоохранения, которая достигла масштабов эпидемии, влияя ~ 11,5% населения только в ¹ США. Риск сердечно-сосудистой смерти или сердечно-сосудистых событий у пациентов с ХБП значительно увеличивается по сравнению с общей популяцией ^2-4. Хотя пациенты с ХБП демонстрируют высокую распространенность традиционных сердечнососудистых факторов риска, это только объясняет часть повышенной их ⁵ случаев сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ). Сосудистая дисфункция является важным нетрадиционных сердечно-сосудистых факторов риска набирает все большее признание в области нефрологии ^6-9.

Хотя многие изменения, скорее всего способствуют развитию артериальной дисфункции, среди тех, наибольшую озабоченность являются развитие сосудистой дисфункции эндотелия, чаще всего оценивается как нарушения эндотелий-зависимой дилатации (EDD), и ужесточение в Лос-АнджелесеRGE упругие артерии ^10. Существуют различные способы, чтобы оценить ПДР и большой жесткости упругих артерии, но наиболее часто используются плечевой артерии поток-опосредованной дилатации ящура _BA и аорты скорость распространения пульсовой волны (aPWV) соответственно. Еще одним часто используемым методом для оценки ПДР измеряет предплечья ответ приток крови к фармакологических агентов, таких как ацетилхолин использованием венозного окклюзии плетизмографию ^11,12. Тем не менее, эта методология требует катетеризации в плечевой артерии, которая является более чем инвазивные ящура _BA и может быть противопоказан пациентам с ХБП. Альтернативный метод для оценки артериальной жесткости является для измерения локальной артериальное соответствие (обратную жесткости) сонной артерии, хотя это и не так широко используется или подтверждена с клиническими конечными точками, как aPWV ^13.

Пациенты с ХБП продемонстрировать как нарушение ящуром _BA ^14-16 и увеличение аорты скорости распространения пульсовой волны аРWV ^13,17,18, еще до нуждающихся в диализе. Важно с клинической точки зрения, оба эти неинвазивных мер сосудистой дисфункции являются независимыми прогностическими факторами будущих сердечно-сосудистых событий и смертности как у пациентов с ХБП ^19-21, а также в других группах населения ^22-26. Эти методы могут быть применены к изучению различных популяций, подверженных риску сердечно-сосудистых заболеваний, в том числе у пациентов с ХБП.

Точные механизмы, посредством которых артериальная дисфункция развивается при ХБП не полностью понял; Однако восстановленный оксид азота (NO) биодоступность является критическим фактором ^27-30 и общий механизм как нарушения EDD и повышенное артериальное жесткость ^10,31. В CKD, окислительный стресс увеличивается и способствует снижению в ближайшие биодоступность ^32-34. Окислительный стресс определяется как чрезмерное биодоступности активных форм кислорода (АФК) по отношению к антиоксидантной защиты. Физиологические стимулы, вклЛУДИНГ воспалительный сигнализацию, способствуют ферментных систем окислителя для производства АФК, в том числе супероксиданиона (O ₂ ● ^-) (например, окислитель фермент NADPH оксидазы.) ^35. Производство супероксида в конечном счете приводит к уменьшает биодоступность оксида азота (NO).

Нарушение NO биодоступность не может, в свою очередь способствовать развитию ХБП, как дисфункция эндотелия является независимым предиктором падающего CKD ^36. Это согласуется с данными о том, что животное Енос торможение вызывает гипертензию (системное и клубочковой), клубочковой ишемия, гломерулосклероз и тубуло-интерстициальный травмы ^37. Действительно, снижение NO биодоступность не представляется необходимой для развития и прогрессирования экспериментальной заболевания почек, который имитирует человеческую болезнь, предполагая, ключевую роль для эндотелиальной дисфункции в человеческой CKD ^38,39.

Маркеры сосудистой окислительного стресса могут быть оценены в версииascular эндотелиальные клетки, собранные из объектов исследования, используя метод изначально разработанный Коломбо и др.. ^40, а модифицированный Уплотнения и др. ^41-43. Использование 2 стерильные J-провода, клетки собирают из локтевой вены, восстановленные, фиксированный, а затем идентифицированы как эндотелиальные клетки и анализировали на экспрессию белков, представляющих интерес с помощью иммунофлюоресценции.

Мы предоставляем здесь обсуждение этой методологии, которая может использоваться в) меры ящура _BA; б) измерения aPWV; в) измерить эндотелия сосудов экспрессию белка клеток маркеров окислительного стресса. Основной упор делается на пациентов с ХБП, не требуя хроническому диализу.

Protocol

Этот протокол следует рекомендациям Колорадо Multiple Совета по биомедицинской этике (COMIRB). 1. Подготовка к испытанию сессии Участники должны выполнить следующие ограничения для наиболее точных измерений: 12 час быстрый из пищи и кофеина, 12 ч воздержание от физических ?…

Representative Results

FMD BA количественно как пик изменению диаметра плечевой артерии следующей реактивной гиперемии. Таким образом, диаметр в покое по сравнению с диаметром после окончания периода 5 мин манжета кровяное давление окклюзии (рис. 1). Панель показан репрезентативный ультразвуков?…

Discussion

Получить точные результаты для ящура _БА и aPWV требуется приобретения высококачественных ультразвуковых изображений и сигналов давления, соответственно. Центральное место в это уместно и продолжал обучение и использование каждого метода оператором ^44. Кроме того, очень важ?…

Materials

Name of Material/ Equipment	Company	Catalog Number	Comments/Description
J-wire	St. Jude	404584	2 per collection
Disposable shorts (MediShorts)	Quick Medical	4507
Non-invasive hemodynamic workstation (NIHem)	Cardiovascualr Engineering	N/A	Includes custom ruler.  An alternate system is the Sphygmocor
Ultrasound	G.E.	Model: Vivid7 Dimension	We use a G.E., but there are many companies and models
Vascular software (Vascular Imager)	Medical Imaging Applications	N/A
R-wave trigger box	Medical Imaging Applications	N/A	custom made
Rapid Cuff Inflation System	Hokanson	Model: Hokanson E20
Forearm blood pressure cuff	Hokanson	N/A	custom cuff with 6.5 x 34 cm bladder
HUVECs	Invitrogren	C-015-5C
Donkey serum	Jackson	017-000-121
Pap pen	Research Products International	195505
VE Cadherin	Abcam	ab33168
AF568	Life Technologies	A11011	depends on specifications of microscpe
AF488	Life Technologies	A11034	depends on specifications of microscpe
Nitrotyrosine antibody	Abcam	ab7048
NADPH oxidase antibody	Upstate	07-001
DAPI	Vector	H-1200
Delicate task wipe (Kimwipe)	Fisher Scientific	06-666-A
Plastic paraffin film (parafilm)	Fisher Scientific	13-374-10
Confocal microscope	Olympus	Model: FV1000 FCS/RICS	many options exist