Électroporation des embryons de poulet in ovo

L’électroporation est une technique utilisée dans la recherche biomédicale qui permet la manipulation de l’expression de gènes par l’intermédiaire de la livraison de matériel génétique étranger dans les cellules. Plus précisément, l’électroporation in ovo est effectuée sur des embryons (Gallus gallus domesticus) dans leurs coquilles à des stades précoces du développement. Lors de cette procédure, de l’ADN ou des fragments nucléotidiques pour l’inactivation génétique sont d’abord injectés dans un tissu cible. Toutefois, le matériel génétique est incapable de pénétrer la membrane plasmique pour effectuer sa fonction à l’intérieur de la cellule. Pour résoudre ce problème, un champ électrique est appliqué, ce qui provoque des perturbations temporaires, altère la stabilité et crée des pores à travers la membrane plasmique. Ce champ électrique permet également d’attirer les acides nucléiques chargés négativement à migrer vers l’électrode positive, donc de conduire de manière efficace l’ADN ou les fragments nucléotidiques pour l’inactivation génétique dans la cellule. L’avantage majeur de cette technique est l’administration de matériel génétique de façon localisée à des groupes de cellules, à des moments spécifiques du développement. Par conséquent, les mécanismes génétiques qui régissent les évènements du développement peuvent être examinés.

Cette vidéo donne un aperçu des principes sous-jacents à l’électroporation in ovo et présente les outils nécessaires pour exécuter cette technique, y compris la fabrication d’aiguilles pour micropipettes, le placement des électrodes et l’exécution de l’électroporation. Le protocole présente les étapes nécessaires pour l’exécution de cette procédure avant d’introduire quelques exemples fascinants qui démontrent comment cette technique est utilisée pour effectuer une variété de manipulations génétiques sur des embryons de poulet.