Eletroporação in ovo de embriões de galinha

A eletroporação é uma técnica utilizada em pesquisas biomédicas que permite a manipulação da expressão genética através da entrega de material genético estrangeiro em células. Mais especificamente, na eletroporação ovo é realizada em filhotes em desenvolvimento precoce (Gallus gallus domesticus) contidos dentro de suas cascas de ovos. Neste procedimento, construções de DNA ou knockdown são injetadas pela primeira vez em um tecido alvo. No entanto, o material genético é incapaz de penetrar na membrana plasmática para realizar sua função dentro da célula. Para resolver esse problema, um campo elétrico é aplicado, causando interrupções temporárias na estabilidade da membrana. Este campo elétrico também faz com que os ácidos nucleicos carregados negativamente migrem em direção ao eletrodo carregado positivamente através dos orifícios na membrana plasmática, conduzindo efetivamente o DNA ou a construção de knockdown para dentro da célula. A maior vantagem dessa técnica é que a entrega de material genético pode ser localizada para tipos de células isoladas em pontos de tempo específicos de desenvolvimento. Como resultado, os mecanismos genéticos que regem eventos individuais de desenvolvimento podem ser examinados.

Este vídeo fornece uma visão geral dos princípios por trás na eletroporação de ovo e introduz as ferramentas necessárias para a técnica, incluindo agulhas capilares, eletrodos e um eletroporador. Um protocolo passo-a-passo para a realização do procedimento também é apresentado antes da discussão de alguns exemplos fascinantes de como a técnica é usada para realizar uma variedade de manipulações genéticas em embriões de frango.