Muestreo de suelos y aislamiento de nematodos entomopatógenos (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Resumen

Nematodos entomopatógenos son gusanos redondos habitan en el suelo que parasitan una amplia gama de insectos. Demostramos métodos de muestreo utilizados para el aislamiento de estos nematodos del suelo mediante dos técnicas: la de cebado de insectos y la trampa de Blanco modificada, para la recuperación de nematodos de muestras de suelo y cadáveres de insecto infectadas, respectivamente.

Resumen

Nematodos entomopatógenos (también conocido como EPN) representan un grupo de nematodos que habitan el suelo que parasitan una amplia gama de insectos. Estos nematodos pertenecen a dos familias: Steinernematidae y Heterorhabditidae. Hasta ahora, más de 70 especies han sido descritas en la Steinernematidae y hay cerca de 20 especies en el Heterorhabditidae. Los nematodos tienen una asociación mutualista con bacterias Enterobacteriaceae y juntos actúan como un complejo insecticida que mata a una amplia gama de especies de insectos.

Aquí, nos centramos en las técnicas más comunes que se consideran para la recogida de EPN del suelo. La segunda parte de esta presentación se centra en la técnica de los insectos-cebo, un enfoque ampliamente utilizado para el aislamiento de EPN a partir de muestras de suelo, y la técnica de trampa Blanco modificada que se utiliza para la recuperación de estos nematodos de los insectos infectados. Estos métodos y técnicas son pasos clave para el éxito del establecimiento de EPN cultodas en el laboratorio y también forman la base para otros bioensayos que consideran estos nematodos como organismos modelo para la investigación en otras disciplinas biológicas. Las técnicas mostradas en esta presentación corresponden a las realizadas y / o diseñado por los miembros de SP Stock de laboratorio, así como los descritos por diversos autores.

Introducción

Muchos nematodos están asociadas con los insectos, y sus interacciones huésped ser beneficiosos o perjudiciales. Aquí, nos centramos en un grupo de nematodos que son patógenos de insectos, también conocido como nematodos entomopatógenos (o EPN). Dos familias de nematodos pertenecen a este grupo de nematodos: Steinernematidae y Heterorhabditidae ^11,13. Su efecto patógeno es, de hecho, conferida por su interacción con las bacterias entéricas bacterias anaerobias facultativas (Xenorhabdus se asocian con steinernematids y bacterias Photorhabdus asociar con heterorhabditids) ^2. Las bacterias se vectored de un insecto huésped a otro ....

Protocolo

1. Toma de Muestras de Suelos

1. Considere cubrir una superficie mínima de 2 a 4 m ² por cada sitio de muestreo.
2. Recoger muestras de suelo a una profundidad de al menos 15 cm (Figura 4).
3. Tomar por lo menos 5 muestras aleatorias dentro de esta área.
4. Tomar 3 submuestras por muestra. Dependiendo del objetivo del estudio, ya sea combinan las submuestras o mantenerlas separadas.
5. Colocar cada muestra en una bolsa de plástico. Considere la posibilidad de doble embolsado para evitar fugas de las muestras (Figura 4).
6. Muestras de la etiqueta con un marcador indeleble. Incluya....

Resultados

Recogida de muestras de suelo

Tercera etapa juveniles infectivos de EPN son los únicos estadios de vida libre en el ciclo de vida de estos nematodos 'que se encuentran en el suelo (Figura 1). Por lo tanto, la recolección de muestras de suelo es un método muy eficiente para recuperarse de estos nematodos. Figura 4 muestra un perfil de suelo que indica la profundidad a la que se deben tomar las muestras. Preservar la humedad de una muestra es un factor clave p.......

Discusión

Esta demostración es la primera de dos presentaciones que describen una serie de técnicas que se utilizan comúnmente para el estudio de la EPN y sus bacterias simbióticas. Estas técnicas representan pasos fundamentales para el establecimiento exitoso de las culturas EPN en el laboratorio y también constituyen la base para otros bioensayos que emplean EPN como organismos modelo para la investigación.

Varios estudios de suelos de EPN han demostrado que su abundancia y distribución pueden varia.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Galleria mellonella	Timberline	http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG	Para la técnica de cebo de insectos
Papel de filtro, 55 mm Celulosa de grado 1	Whatman/VWR	28450-048 Cámara de	infección y conjunto de trampa blanca
60 x 15 mm Placas de Petri	VWR	25384-092 Cámara de	infección y conjunto de trampa blanca
Placas de Petri de 100 x 15 mm	VWR	25384-088	Cámara de infección y montaje de trampa blanca
Bolsas de plástico ZIPloc	Ace Hardware o ferretería		Muestreo de suelos
Pipeta mecánica P1000, P200 ml	VWR	89130-562; 89130-566	Conjunto de cámara de infección y trampa blanca
Puntas de pippetor 1000 ml, 200 ml	VWR	16466-004 ; 53510 Cámara de	infección y conjunto de trampa blanca
Bleach	Ace Hardware o ferretería		Muestreo de suelos, desinfectante
Hipoclorito de sodio	Ace Hardware o ferretería		Muestreo de suelos, desinfección
70% Alochol etílico	AAPER	17212945	Muestreo de suelos, desinfección
Palas	Ace Ferretería o ferretería local	N/A	Muestreo
suelo Muestreador de suelo tubular	Accuproducts		Muestreo de suelo Sonda
suelo, mango largo	Nupla	PRB4T 69401 Classic	Toma de muestras de suelo
Cinta métrica	Ace Hardware o ferretería		Toma de muestras de suelo
Cinta de señalización	Ace Hardware o ferretería		Toma de muestras de suelo
Matraces de cultivo de tejidos	VWR	Falcon, 29185-304	Trampa blanca, colección de EPN
Botellas de lavado, polietileno, boca ancha	VWR	16650-107	Trampa blanca, colección de EPN

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