Ultrasonografía de alta resolución para el análisis de tumores ATC ortotópicos en un modelo de ratón modificado genéticamente
Summary
El presente protocolo describe la ecografía de alta frecuencia para visualizar toda la glándula tiroides del ratón y monitorear el crecimiento del carcinoma anaplásico de tiroides.
Abstract
El carcinoma anaplásico de tiroides (ATC) se asocia con un pronóstico precario y una mediana de supervivencia corta, pero ningún tratamiento efectivo mejora significativamente los resultados. Los modelos murinos genéticamente modificados que imitan la progresión del ATC pueden ayudar a los investigadores a estudiar tratamientos para esta enfermedad. Cruzando tres genotipos diferentes de ratones, un TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; Se desarrolló el modelo ATC transgénico Trp53 Δex2-10/Δex2-10. El modelo murino ATC fue inducido por una inyección intraperitoneal de tamoxifeno con sobreexpresión de BrafV600E y deleción de Trp53, y los tumores se generaron dentro de aproximadamente 1 mes. Se aplicó ultrasonido de alta resolución para investigar el inicio y la progresión del tumor, y la curva de crecimiento dinámico se obtuvo midiendo el tamaño del tumor. En comparación con la resonancia magnética (RM) y la tomografía computarizada, el ultrasonido tiene ventajas en la observación del modelo murino ATC, como ser no invasivo, portátil, en tiempo real y sin exposición a la radiación. El ultrasonido de alta resolución es adecuado para mediciones dinámicas y múltiples. Sin embargo, el examen ultrasonográfico de la tiroides en ratones requiere conocimientos anatómicos relevantes y experiencia. Este artículo proporciona un procedimiento detallado para utilizar ultrasonido de alta resolución para escanear tumores en el modelo ATC transgénico. Mientras tanto, se enumeran el ajuste de parámetros ultrasónicos, las habilidades de escaneo de ultrasonido, la anestesia y la recuperación de los animales, y otros elementos que necesitan atención durante el proceso.
Introduction
Aunque el carcinoma anaplásico de tiroides (ATC) representa menos del 2% de los cánceres de tiroides, causa más del 50% de las muertes relacionadas con el cáncer de tiroides anualmente. La mediana del tiempo de supervivencia después del diagnóstico con ATC es de sólo unos 6 meses, y no hay tratamientos disponibles que mejoren significativamente la supervivencia 1,2.
La rareza del ATC ha obstaculizado la investigación que estudia cómo comienza la enfermedad y progresa agresivamente. Recientemente se han puesto a disposición modelos de ratón genéticamente modificados que imitan la enfermedad, que proporcionan información sobre la enfermedad y sus respuestas a posibles tratamientos 3,4,5. Tales estudios requieren imágenes tumorales precisas para las mediciones y el monitoreo, que generalmente se realiza mediante imágenes por resonancia magnética, tomografía computarizada o ecografía de alta resolución 6,7. La ecografía ha sido ampliamente utilizada en órganos de ratón. Tiene ventajas sobre la resonancia magnética y la tomografía computarizada, ya que puede realizarse en tiempo real y no expone al sujeto a radiación, y el equipo necesario es lo suficientemente pequeño como para ser portátil 8,9. Sin embargo, los estudios sobre el monitoreo continuo del crecimiento de ATC mediante ultrasonido son raros; Por lo tanto, este trabajo explora la utilidad del ultrasonido en este contexto.
Aquí, se presenta un protocolo para usar ecografía de alta resolución para escanear, monitorear y medir tumores con precisión en un modelo de ratón de ATC.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este protocolo utiliza ecografía de alta resolución para analizar tumores ATC ortotópicos en un modelo de ratón modificado genéticamente. El modelo transgénico, con un genotipo de TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; Trp53 Δex2-10/Δex2-10, fue desarrollado en nuestro laboratorio. Los animales sobreexpresan BrafV600E y carecen de Trp53; La inyección de tamoxifeno por vía intraperitoneal a los animales conduce al crecimiento del tumor después de aproximadamente 1 mes<sup cl…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta investigación no recibió ninguna subvención específica de agencias de financiación públicas, comerciales o sin fines de lucro.
Materials
| Adhesive tape | Winner | ||
| Anesthesia system | RWDlifescience | ||
| Brafflox/wt mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Chamber for anesthesia induction | RWDlifescience | ||
| Cotton swabs | Winner | ||
| Depilatory cream | Veet | ||
| Electric heating blanket | Petbee | ||
| Isoflurane vaporizer | RWDlifescience | ||
| Medical gloves | Winner | ||
| Paper towels | Breeze | B914JY | |
| TPO-cre/ERT2 mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Trp53flox/wt mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Ultrasound gel | Keppler | KL-250 | |
| Ultrasound machine | VisualSonics | Vevo 3100 |
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