Nanopartiküllerin ve Nanoyapılı Yüzeylerin Antimikrobiyal Aktivitelerinin İn Vitro Olarak Değerlendirilmesi
Summary
İn vitro teknikleri kullanarak nanopartiküllerin ve nanoyapılı yüzeylerin antimikrobiyal aktivitelerini değerlendirmek için dört yöntem sunuyoruz. Bu yöntemler, farklı nanopartiküllerin ve nanoyapılı yüzeylerin çok çeşitli mikrobiyal türlerle etkileşimlerini incelemek için uyarlanabilir.
Abstract
Nanopartiküllerin ve gümüş, çinko oksit, titanyum dioksit ve magnezyum oksit gibi nanoyapılı yüzeylerin antimikrobiyal aktiviteleri daha önce klinik ve çevresel ortamlarda ve tüketilebilir gıda ürünlerinde araştırılmıştır. Bununla birlikte, kullanılan deneysel yöntem ve materyallerdeki tutarlılık eksikliği, aynı nanoyapı tipleri ve bakteri türleri üzerinde yapılan çalışmalar arasında bile çelişkili sonuçlarla sonuçlanmıştır. Nanoyapıları bir ürün tasarımında katkı maddesi veya kaplama olarak kullanmak isteyen araştırmacılar için, bu çelişkili veriler klinik ortamlarda kullanımlarını sınırlar.
Bu ikilemle yüzleşmek için, bu makalede, nanopartiküllerin ve nanoyapılı yüzeylerin antimikrobiyal aktivitelerini belirlemek için dört farklı yöntem sunuyoruz ve farklı senaryolarda uygulanabilirliklerini tartışıyoruz. Tutarlı yöntemlerin uyarlanmasının, çalışmalar arasında karşılaştırılabilecek ve farklı nanoyapı tipleri ve mikrobiyal türler için uygulanabilecek tekrarlanabilir verilere yol açması beklenmektedir. Nanopartiküllerin antimikrobiyal aktivitelerini belirlemek için iki yöntem ve nanoyapılı yüzeylerin antimikrobiyal aktiviteleri için iki yöntem sunuyoruz.
Nanopartiküller için, doğrudan ko-kültür yöntemi, nanopartiküllerin minimum inhibitör ve minimum bakterisidal konsantrasyonlarını belirlemek için kullanılabilir ve doğrudan maruz kalma kültürü yöntemi, nanopartikül maruziyetinden kaynaklanan gerçek zamanlı bakteriyostatik ve bakterisidal aktiviteyi değerlendirmek için kullanılabilir. Nanoyapılı yüzeyler için, doğrudan kültür yöntemi, bakterilerin dolaylı ve doğrudan nanoyapılı yüzeylerle temas halinde yaşayabilirliğini belirlemek için kullanılır ve odaklanmış temasa maruz kalma yöntemi, nanoyapılı bir yüzeyin belirli bir alanındaki antimikrobiyal aktiviteyi incelemek için kullanılır. Nanopartiküllerin ve nanoyapılı yüzeylerin antimikrobiyal özelliklerini belirlerken in vitro çalışma tasarımı için dikkate alınması gereken temel deneysel değişkenleri tartışıyoruz. Tüm bu yöntemler nispeten düşük maliyetlidir, ustalaşması nispeten kolay ve tutarlılık için tekrarlanabilir teknikler kullanır ve çok çeşitli nanoyapı tiplerine ve mikrobiyal türlere uygulanabilir.
Introduction
Sadece ABD’de, yılda 1,7 milyon kişi hastane kaynaklı bir enfeksiyon (HAI) geliştirir ve bu enfeksiyonların her 17’sinden biri ölümle sonuçlanır1. Ek olarak, HAI’ler için tedavi maliyetlerinin yıllık 28 milyar dolar ile 45 milyar dolar arasında değiştiği tahmin edilmektedir 1,2. Bu HAI’lere, genellikle kronik yara enfeksiyonlarından izole edilen ve genellikle olumlu bir hasta sonucu elde etmek için kapsamlı tedavi ve zaman gerektiren metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA)3,4 ve Pseudomonas aeruginosa4 baskındır.
Son birkaç on yılda, bu ve diğer patojenik bakterilerle ilgili enfeksiyonları tedavi etmek için çoklu antibiyotik sınıfları geliştirilmiştir. Örneğin, rifamisin analogları MRSA, diğer gram-pozitif ve gram-negatif enfeksiyonları ve Mycobacterium spp. enfeksiyonlarını tedavi etmek için kullanılmıştır5. 1990’larda, artan sayıda M. tuberculosis enfeksiyonunu etkili bir şekilde tedavi etmek için, etkinliklerini artırmak için ek ilaçlar rifamisin analogları ile birleştirilmiştir. Bununla birlikte, M. tuberculosis vakalarının yaklaşık% 5’i rifampisin 5,6’ya dirençli olmaya devam etmektedir ve çoklu ilaca dirençli bakteriler7 ile ilgili endişeler artmaktadır. Şu anda, HAI’lerin tedavisinde tek başına antibiyotik kullanımı yeterli olmayabilir ve bu, alternatif antimikrobiyal tedaviler için devam eden bir araştırmaya neden olmuştur1.
Gümüş (Ag)8,9,10 ve altın (Au)11 gibi ağır metaller ve nanopartikül (NP) formunda (sırasıyla AgNP, AuNP, TiO2NP ve ZnONP) titanyum dioksit (TiO2)12 ve çinko oksit (ZnO)13 gibi seramikler antimikrobiyal aktiviteleri açısından incelenmiş ve potansiyel antibiyotik alternatifleri olarak tanımlanmıştır. Ek olarak, magnezyum alaşımları (Mg alaşımları)14,15,16, magnezyum oksit nanopartikülleri 17,18,19,20,21 ve magnezyum hidroksit nanopartikülleri [sırasıyla nMgO ve nMg(OH)2] 22,23,24 gibi biyolojik olarak emilebilir malzemeler , ayrıca incelenmiştir. Bununla birlikte, nanopartiküllerin önceki antimikrobiyal çalışmaları tutarsız malzemeler ve araştırma yöntemleri kullanmış, bu da karşılaştırılması zor veya imkansız olan ve bazen doğada çelişkili olan verilerle sonuçlanmıştır18,19. Örneğin, gümüş nanopartiküllerin minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) ve minimum bakterisidal konsantrasyonu (MBC) farklı çalışmalarda önemli ölçüde değişmiştir. Ipe ve ark.25, gram-pozitif ve gram-negatif bakterilere karşı MIC’leri belirlemek için ortalama parçacık boyutu ~ 26 nm olan AgNP’lerin antibakteriyel aktivitelerini değerlendirdi. P. aeruginosa, E. coli, S. aureus ve MRSA için tanımlanan MIC’ler sırasıyla 2 μg / mL, 5 μg / mL, 10 μg / mL ve 10 μg / mL idi. Buna karşılık, Parvekar ve ark.26, ortalama parçacık boyutu 5 nm olan AgNP’leri değerlendirdi. Bu örnekte, AgNP MIC ve 0.625 mg / mL’lik bir MBC’nin S. aureus’a karşı etkili olduğu bulunmuştur. Ek olarak, Loo ve ark.27, AgNP’leri 4.06 nm boyutunda değerlendirdi. E. coli bu nanopartiküllere maruz kaldığında, MIC ve MBC 7.8 μg / mL’de rapor edildi. Son olarak, Ali ve ark.28, ortalama 18 nm büyüklüğündeki küresel AgNP’lerin antibakteriyel özelliklerini araştırdılar. P. aeruginosa, E. coli ve MRSA bu nanopartiküllere maruz kaldığında, MIC sırasıyla 27 μg / mL, 36 μg / mL, 27 μg / mL ve 36 μg / mL’de tanımlandı ve MBC sırasıyla 36 μg / mL, 42 μg / mL ve 30 μg / mL’de tanımlandı.
Nanopartiküllerin antibakteriyel aktivitesi son yıllarda kapsamlı bir şekilde çalışılmış ve rapor edilmiş olmasına rağmen, çalışmalar arasında doğrudan karşılaştırmalara izin vermek için kullanılan malzemeler ve araştırma yöntemleri için bir standart yoktur. Bu nedenle, materyalleri ve yöntemleri tutarlı tutarken nanopartiküllerin antimikrobiyal aktivitelerini karakterize etmek ve karşılaştırmak için doğrudan ko-kültür yöntemi (yöntem A) ve doğrudan maruz kalma yöntemi (yöntem B) olmak üzere iki yöntem sunuyoruz.
Nanopartiküllere ek olarak, nanoyapılı yüzeyler de antibakteriyel aktiviteler açısından incelenmiştir. Bunlar, grafen nanotabakalar, karbon nanotüpler ve grafit29 gibi karbon bazlı malzemelerin yanı sıra saf Mg ve Mg alaşımlarını içerir. Bu malzemelerin her biri, karbon bazlı materyaller tarafından hücre zarlarına uygulanan fiziksel hasar ve Mg bozunduğunda reaktif oksijen türlerinin (ROS) salınması yoluyla metabolik süreçlere veya DNA’ya verilen hasar dahil olmak üzere en az bir antibakteriyel mekanizma sergilemiştir. Ek olarak, çinko (Zn) ve kalsiyum (Ca) Mg alaşımlarının oluşumunda birleştirildiğinde, Mg matris tane boyutunun rafine edilmesi artar, bu da sadece Mg numunelerine kıyasla substrat yüzeylerine bakteriyel yapışmada bir azalmaya yol açar14. Antibakteriyel aktiviteyi göstermek için, doğrudan ve dolaylı yüzey teması ile bakteriyel koloni oluşturan birimlerin (CFU’lar) nicelleştirilmesi yoluyla zaman içinde nanoyapılı malzemeler üzerinde ve çevresinde bakteriyel yapışmayı belirleyen doğrudan kültür yöntemini (yöntem C) sunuyoruz.
Boyut, şekil ve yönelim dahil olmak üzere yüzeylerdeki nanoyapıların geometrisi, malzemelerin bakterisit aktivitelerini etkileyebilir. Örneğin, Lin ve ark.16 , eloksal ve elektroforetik birikim (EPD) yoluyla Mg substratlarının yüzeylerinde farklı nanoyapılı MgO katmanları ürettiler. Nanoyapılı yüzeye in vitro olarak bir süre maruz kaldıktan sonra, S. aureus’un büyümesi, işlenmemiş Mg’ye kıyasla önemli ölçüde azaltılmıştır. Bu, nanoyapılı yüzeyin, işlenmemiş metalik Mg yüzeyine karşı bakteriyel yapışmaya karşı daha büyük bir gücünü gösterdi. Bu makalede, çeşitli nanoyapılı yüzeylerin antibakteriyel özelliklerinin farklı mekanizmalarını ortaya koymak için, ilgi alanındaki hücre-yüzey etkileşimlerini belirleyen odaklanmış temasa maruz kalma yöntemi (yöntem D) tartışılmıştır.
Bu makalenin amacı, farklı nanopartiküllere, nanoyapılı yüzeylere ve mikrobiyal türlere uygulanabilir dört in vitro yöntem sunmaktır. Karşılaştırılabilirlik için tutarlı, tekrarlanabilir veriler üretmek üzere her yöntem için temel hususları tartışıyoruz. Spesifik olarak, doğrudan ko-kültür yöntemi17 ve doğrudan maruz kalma yöntemi, nanopartiküllerin antimikrobiyal özelliklerini incelemek için kullanılır. Doğrudan ko-kültür yöntemiyle, bireysel türler için minimum inhibitör ve minimum bakterisidal konsantrasyonlar (sırasıyla MIC ve MBC90-99.99) belirlenebilir ve birden fazla tür için en güçlü konsantrasyon (MPC) belirlenebilir. Doğrudan maruz kalma yöntemi sayesinde, nanopartiküllerin minimum inhibitör konsantrasyonlardaki bakteriyostatik veya bakterisidal etkileri, zaman içinde gerçek zamanlı optik yoğunluk okumaları ile karakterize edilebilir. Doğrudan kültür14 yöntemi, nanoyapılı yüzeylerle temas halinde olan bakterileri doğrudan ve dolaylı olarak incelemek için uygundur. Son olarak, odaklanmış temaslı maruz kalma16 yöntemi, bakterilerin doğrudan uygulanması ve hücre-nanoyapı arayüzünde bakteriyel büyümenin karakterizasyonu yoluyla nanoyapılı bir yüzeydeki belirli bir alanın antibakteriyel aktivitesini incelemek için sunulmuştur. Bu yöntem, Japon Endüstri Standardı JIS Z 2801: 200016’dan modifiye edilmiştir ve mikrop-yüzey etkileşimlerine odaklanmak ve mikrobiyal kültürdeki toplu numune bozulmasının antimikrobiyal aktiviteler üzerindeki etkilerini dışlamak için tasarlanmıştır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nanopartiküllerin ve nanoyapılı yüzeylerin antibakteriyel aktivitelerini karakterize etmek için dört in vitro yöntem (AD) sunduk. Bu yöntemlerin her biri, nanomalzemelere yanıt olarak zaman içinde bakteri büyümesini ve canlılığını ölçerken, zaman içinde ilk bakteriyel tohumlama yoğunluğunu, büyümesini ve canlılığını ölçmek için kullanılan yöntemlerde bazı farklılıklar vardır. Bu yöntemlerden üçü, doğrudan eş-kültür yöntemi (A)17, doğrudan k?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar, ABD Ulusal Bilim Vakfı (NSF CBET ödülü 1512764 ve NSF PIRE 1545852), Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH NIDCR 1R03DE028631), Kaliforniya Üniversitesi (UC) Regents Fakülte Geliştirme Bursu, Araştırma Tohumu Hibe Komitesi (Huinan Liu) ve Patricia Holt-Torres’e verilen UC-Riverside Lisansüstü Araştırma Mentorluk Programı Hibesinin finansal desteğini takdir etmektedir. Yazarlar, SEM / EDS kullanımı için UC-Riverside’daki Gelişmiş Mikroskopi ve Mikroanaliz Merkezi Tesisi (CFAMM) ve XRD kullanımı için Dr. Perry Cheung tarafından sağlanan yardımı takdir etmektedir. Yazarlar ayrıca Morgan Elizabeth Nator ve Samhitha Tumkur’a deneyler ve veri analizleri konusundaki yardımları için teşekkür eder. Bu makalede ifade edilen herhangi bir görüş, bulgu, sonuç veya öneri yazarlara aittir ve Ulusal Bilim Vakfı veya Ulusal Sağlık Enstitüleri’nin görüşlerini yansıtmak zorunda değildir.
Materials
| 1.5 mL microcentrifuge tube | Milipore Sigma | Z336777 | |
| 80 L NTRL Certified Convection Drying Oven | MTI Corporation | BPG-7082 | https://www.mtixtl.com/BPG-7082.aspx |
| (hydroxymethyl) aminomethane buffer pH 8.5; Tris buffer | Sigma-Aldrich | 42457 | |
| AnaSpec THIOFLAVIN T ULTRAPURE GRADE | Fisher Scientific | 50-850-291 | |
| Electron-multiplying charge-coupled device digital camera | Hamamatsu | C9100-13 | |
| Falcon 15 mL conical tubes | Fisher Scientific | 14-959-49B | |
| Gluteraldehyde | Sigma-Aldrich | G5882 | |
| Hemocytometer | Brightline, Hausser Scientific | 1492 | |
| Inductively coupled plasma – optical emission spectrometry (ICP-OES) | PerkinElmer | 8000 | |
| Inverse microscope | Nikon | Eclipse Ti-S | |
| Luria Bertani Broth | Sigma Life Science | L3022 | |
| Luria Bertani Broth + agar | Sigma Life Science | L2897 | |
| MacroTube 5.0 | Benchmark Scientific | C1005-T5-ST | |
| Magnesium oxide nanoparticles | US Research Nanomaterials, Inc | Stock #: US3310 M | MgO, 99+%, 20 nm |
| MS Semi-Micro Balance | Mettler Toledo | MS105D | |
| Nitrocellulose paper | Fisherbrand | 09-801A | |
| Non-tissue treated 12-well polystyrene plate | Falcon Corning Brand | 351143 | |
| Non-tissue treated 48-well polystyrene plate | Falcon Corning Brand | 351178 | |
| Non-tissue treated 96-well polystyrene plate | Falcon Corning Brand | 351172 | |
| Petri dish 100 mm | VWR | 470210-568 | |
| Petri dish, 15 mm | Fisherbrand | FB0875713A | |
| pH meter | VWR | SP70P | |
| Scanning electron microscopy (SEM) | TESCAN | Vega3 SBH | |
| Sonicator | VWR | 97043-936 | |
| Table top centrifuge | Fisher Scientific | accuSpin Micro 17 | |
| Table top centrifuge | Eppendorf | Centrifuge 5430 | |
| Tryptic Soy Agar | MP | 1010617 | |
| Tryptic Soy Broth | Sigma-Aldrich | 22092-500G | |
| UV-Vis spectrophotometer | Tecan | Infinite 200 PRO | https://lifesciences.tecan.com/plate_readers/infinite_200_pro |
| VWR Benchmark Incu-shaker 10L | VWR | N/A | |
| X-ray power defraction | Panalytical | N/A | PANalytical Empyrean Series 2 |
Referencias
- Haque, M., Sartelli, M., McKimm, J., Abu Bakar, M. Health care-associated infections – An overview. Infection and Drug Resistance. 11, 2321-2333 (2018).
- O’Connell, K. M. G. Combating multidrug-resistant bacteria: Current strategies for the discovery of novel antibacterials. Angewandte Chemie. 52 (41), 10706-10733 (2013).
- Li, B., Webster, T. J. Bacteria antibiotic resistance: New challenges and opportunities for implant-associated orthopedic infections. Journal of Orthopaedic Research. 36 (1), 22-32 (2018).
- Yung, D. B. Y., Sircombe, K. J., Pletzer, D. Friends or enemies? The complicated relationship between Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. Molecular Microbiology. 116 (1), 1-15 (2021).
- Adams, R. A. Rifamycin antibiotics and the mechanisms of their failure. The Journal of Antibiotics. 74 (11), 786-798 (2021).
- Harding, E. WHO global progress report on tuberculosis elimination. The Lancet. Respiratory Medicine. 8 (1), 19 (2020).
- Baptista, P. V. Nano-strategies to fight multidrug resistant bacteria-"A battle of the titans". Frontiers in Microbiology. 9, 1441 (2018).
- Seong, M., Lee, D. G. Silver nanoparticles against Salmonella enterica serotype typhimurium: Role of inner membrane dysfunction. Current Microbiology. 74 (6), 661-670 (2017).
- Dasgupta, N., Ramalingam, C. Silver nanoparticle antimicrobial activity explained by membrane rupture and reactive oxygen generation. Environmental Chemistry Letters. 14, 477-485 (2016).
- Su, H. L. The disruption of bacterial membrane integrity through ROS generation induced by nanohybrids of silver and clay. Biomaterials. 30 (30), 5979-5987 (2009).
- Cui, Y. The molecular mechanism of action of bactericidal gold nanoparticles on Escherichia coli. Biomaterials. 33 (7), 2327-2333 (2012).
- Ranjan, S., Ramalingam, C. Titanium dioxide nanoparticles induce bacterial membrane rupture by reactive oxygen species generation. Environmental Chemistry Letters. 14, 487-494 (2016).
- Kadiyala, U., Turali-Emre, E. S., Bahng, J. H., Kotov, N. A., VanEpps, J. S. Unexpected insights into antibacterial activity of zinc oxide nanoparticles against methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Nanoscale. 10 (10), 4927-4939 (2018).
- Zhang, C. Antimicrobial bioresorbable Mg-Zn-Ca alloy for bone repair in a comparison study with Mg-Zn-Sr alloy and pure Mg. ACS Biomaterials Science and Engineering. 6 (1), 517-538 (2020).
- Lock, J. Y. Degradation and antibacterial properties of magnesium alloys in artificial urine for potential resorbable ureteral stent applications. Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 102 (3), 781-792 (2014).
- Lin, J., Nguyen, N. -. Y. T., Zhang, C., Ha, A., Liu, H. H. Antimicrobial properties of MgO nanostructures on magnesium substrates. ACS Omega. 5 (38), 24613-24627 (2020).
- Nguyen, N. -. Y. T., Grelling, N., Wetteland, C. L., Rosario, R., Liu, H. Antimicrobial activities and mechanisms of magnesium oxide nanoparticles (nMgO) against pathogenic bacteria, yeasts, and biofilms. Scientific Reports. 8 (1), 16260 (2018).
- Bindhu, M. R., Umadevi, M., Micheal, M. K., Arasu, M. V., Al-Dhabi, N. A. Structural morphological and optical properties of MgO nanoparticles for antibacterial applications. Materials Letters. 166, 19-22 (2016).
- He, Y. Study on the mechanism of antibacterial action of magnesium oxide nanoparticles against foodborne pathogens. Journal of Nanobiotechnology. 14 (1), 54 (2016).
- Zhang, K., An, Y., Zhang, L., Dong, Q. Preparation of controlled nano-MgO and investigation of its bactericidal properties. Chemosphere. 89 (11), 1414-1418 (2012).
- Hayat, S. In vitro antibiofilm and anti-adhesion effects of magnesium oxide nanoparticles against antibiotic resistant bacteria. Microbiology and Immunology. 62 (4), 211-220 (2018).
- Dong, C. Investigation of Mg(OH)2 nanoparticles as an antibacterial agent. Journal of Nanoparticle Research. 12, 2101-2109 (2010).
- Halbus, A. F., Horozov, T. S., Paunov, V. N. Controlling the antimicrobial action of surface modified magnesium hydroxide nanoparticles. Biomimetics. 4 (2), 41 (2019).
- Pan, X. Investigation of antibacterial activity and related mechanism of a series of Nano-Mg(OH)2. ACS Applied Materials and Interfaces. 5 (3), 1137-1142 (2013).
- Ipe, D. S., Kumar, P. T. S., Love, R. M., Hamlet, S. M. Silver nanoparticles at biocompatible dosage synergistically increases bacterial susceptibility to antibiotics. Frontiers in Microbiology. 11, 1074 (2020).
- Parvekar, P., Palaskar, J., Metgud, S., Maria, R., Dutta, S. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of silver nanoparticles against Staphylococcus aureus. Biomaterial Investigations in Dentistry. 7 (1), 105-109 (2020).
- Loo, Y. Y. In vitro antimicrobial activity of green synthesized silver nanoparticles against selected gram-negative foodborne pathogens. Frontiers in Microbiology. 9, 1555 (2018).
- Ali, K. Microwave accelerated green synthesis of stable silver nanoparticles with Eucalyptus globulus leaf extract and their antibacterial and antibiofilm activity on clinical isolates. PLoS One. 10 (7), e0131178 (2015).
- Al-Jumaili, A., Alancherry, S., Bazaka, K., Jacob, M. V. Review on the antimicrobial properties of carbon nanostructures. Materials. 10 (9), 1066 (2017).
- MTI Corporation. . 80L NTRL Certified Convection Drying Oven (18″x16″x18″, 250°C) with Digital Temperature Controller (SSP) – BPG-7082. , (2022).
- CHEBI. . Tris (CHEBI:9754). , (2023).
- . Cold Spring Harbor Protocols. Phosphate buffer. Cold Spring Harbor Laboratory Press. , (2016).
- Barat, R., Montoya, T., Seco, A., Ferrer, J. Modelling biological and chemically induced precipitation of calcium phosphate in enhanced biological phosphorus removal systems. Water Research. 45, 3744-3752 (2011).
- Carlsson, H., Aspegren, H., Lee, N., Hilmer, A. Calcium phosphate precipitation in biological phosphorus removal systems. Water Research. 31 (5), 1047-1055 (1997).
- Gonzalez, J., Hou, R. Q., Nidadavolu, E. P. S., Willumeit-Römer, R., Feyerabend, F. Magnesium degradation under physiological conditions – Best practice. Bioactive Materials. 3 (2), 174-185 (2018).
- Oyane, A., et al. Preparation and assessment of revised simulated body fluids. Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 65 (2), 188-195 (2003).
- Xia, B., et al. Amyloid histology stain for rapid bacterial endospore imaging. Journal of Clinical Microbiology. 49 (8), 2966-2975 (2011).
- Pankey, G. A., Sabath, L. D. Clinical relevance of bacteriostatic versus bactericidal mechanisms of action in the treatment of Gram-positive bacterial infections. Clinical Infectious Diseases. 38 (6), 864-870 (2004).
- Ribeiro, M., Monteiro, F. J., Ferraz, M. P. Infection of orthopedic implants with emphasis on bacterial adhesion process and techniques used in studying bacterial-material interactions. Biomatter. 2 (4), 176-194 (2012).
