Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Evaluación de las actividades antimicrobianas de nanopartículas y superficies nanoestructuradas in vitro

4.7K visualizaciones

⸱

DOI:

10.3791/64712

⸱

21 de abril de 2023

 ,  , 

En este artículo

Resumen

Presentamos cuatro métodos para evaluar las actividades antimicrobianas de nanopartículas y superficies nanoestructuradas utilizando técnicas in vitro . Estos métodos se pueden adaptar para estudiar las interacciones de diferentes nanopartículas y superficies nanoestructuradas con una amplia gama de especies microbianas.

Resumen

Las actividades antimicrobianas de nanopartículas y superficies nanoestructuradas, como plata, óxido de zinc, dióxido de titanio y óxido de magnesio, se han explorado previamente en entornos clínicos y ambientales y en productos alimenticios consumibles. Sin embargo, la falta de consistencia en los métodos experimentales y materiales utilizados ha culminado en resultados contradictorios, incluso entre estudios de los mismos tipos de nanoestructuras y especies bacterianas. Para los investigadores que desean emplear nanoestructuras como aditivo o recubrimiento en el diseño de un producto, estos datos contradictorios limitan su utilización en entornos clínicos.

Para enfrentar este dilema, en este artículo, presentamos cuatro métodos diferentes para determinar las actividades antimicrobianas de nanopartículas y superficies nanoestructuradas, y discutimos su aplicabilidad en diferentes escenarios. Se espera que la adaptación de métodos consistentes conduzca a datos reproducibles que puedan compararse entre estudios e implementarse para diferentes tipos de nanoestructuras y especies microbianas. Introducimos dos métodos para determinar las actividades antimicrobianas de las nanopartículas y dos métodos para las actividades antimicrobianas de las superficies nanoestructuradas.

Para las nanopartículas, el método de cocultivo directo se puede utilizar para determinar las concentraciones bactericidas mínimas inhibitorias y mínimas de nanopartículas, y el método de cultivo de exposición directa se puede utilizar para evaluar la actividad bacteriostática en tiempo real frente a la actividad bactericida resultante de la exposición a nanopartículas. Para superficies nanoestructuradas, el método de cultivo directo se utiliza para determinar la viabilidad de las bacterias indirectamente y directamente en contacto con superficies nanoestructuradas, y el método de exposición de contacto enfocado se utiliza para examinar la actividad antimicrobiana en un área específica de una superficie nanoestructurada. Discutimos las variables experimentales clave a considerar para el diseño del estudio in vitro al determinar las propiedades antimicrobianas de nanopartículas y superficies nanoestructuradas. Todos estos métodos son relativamente de bajo costo, emplean técnicas que son relativamente fáciles de dominar y repetibles para la consistencia, y son aplicables a una amplia gama de tipos de nanoestructuras y especies microbianas.

Introducción

Solo en los Estados Unidos, 1.7 millones de personas desarrollan una infección adquirida en el hospital (HAI) anualmente, y una de cada 17 de estas infecciones resulta en la muerte1. Además, se estima que los costos de tratamiento de las IRAS oscilan entre $ 28 mil millones y $ 45 mil millones anuales 1,2. Estas IRAS están predominadas por Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM)3,4 y Pseudomonas aeruginosa4, que comúnmente se aíslan de infecciones crónicas de heridas y gener....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

Para presentar los métodos de cocultivo directo y exposición directa, utilizamos nanopartículas de óxido de magnesio (nMgO) como material modelo para demostrar las interacciones bacterianas. Para presentar el cultivo directo y los métodos de exposición de contacto focalizado, utilizamos una aleación de Mg con superficies nanoestructuradas como ejemplos.

1. Esterilización de nanomateriales

NOTA: Todos los nanomateriales deben ser esterilizados o desinfectados antes del cultivo microbiano. Los métodos que se pueden utilizar incluyen calor, presión, radiación y desinfectantes, pero la tolerancia de lo....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

La identificación de la actividad antibacteriana de nanopartículas de óxido de magnesio y superficies nanoestructuradas se ha presentado utilizando cuatro métodos in vitro que son aplicables a diferentes tipos de materiales y especies microbianas.

El método A y el método B examinan las actividades bacterianas cuando se exponen a nanopartículas en una fase de retraso (método A) y fase logarítmica (método B) durante una duración de 24 h o más. El método A proporciona resultados con resp.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

Hemos presentado cuatro métodos in vitro (A-D) para caracterizar las actividades antibacterianas de nanopartículas y superficies nanoestructuradas. Si bien cada uno de estos métodos cuantifica el crecimiento bacteriano y la viabilidad a lo largo del tiempo en respuesta a los nanomateriales, existe cierta variación en los métodos utilizados para medir la densidad de siembra bacteriana inicial, el crecimiento y la viabilidad a lo largo del tiempo. Tres de estos métodos, el método de cocultivo directo (A)

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

Los autores no tienen conflictos de intereses.

Agradecimientos

Los autores aprecian el apoyo financiero de la Fundación Nacional de Ciencias de los Estados Unidos (premio NSF CBET 1512764 y NSF PIRE 1545852), los Institutos Nacionales de Salud (NIH NIDCR 1R03DE028631), la Beca de Desarrollo Docente Regentes de la Universidad de California (UC), la Subvención Semilla del Comité de Investigación (Huinan Liu) y la Beca del Programa de Mentoría de Investigación de Posgrado de UC-Riverside otorgada a Patricia Holt-Torres. Los autores aprecian la asistencia proporcionada por la Instalación Central de Microscopía y Microanálisis Avanzados (CFAMM) en UC-Riverside para el uso de SEM / EDS y el Dr. Perry Cheung para el uso de XRD. Los auto....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Tubo de microcentrífuga de 1,5 mLMilipore SigmaZ336777
80 L Horno de secado por convección con certificación NTRL MTI CorporationBPG-7082 tampón dehttps://www.mtixtl.com/BPG-7082.aspx
(hidroximetil) aminometano pH 8.5; Tampón Tris Sigma-Aldrich 42457
AnaSpec  TIOFLAVINA T GRADO ULTRAPUROFisher Scientific50-850-291
Dispositivo de carga acoplada multiplicadora de electrones cámara digital HamamatsuC9100-13
Falcon 15 mL tubos cónicosFisher Scientific14-959-49B
GluteraldehídoSigma-Aldrich G5882
HemocitómetroBrightline, Hausser Scientific1492
Plasma acoplado inductivamente - espectrometría de emisión óptica (ICP-OES)PerkinMicroscopio inverso Elmer8000
NikonEclipse Ti-S
Luria Bertani CaldoSigma Ciencias de la Vida L3022
Caldo Luria Bertani + agarSigma Ciencias de la Vida L2897
MacroTube 5.0   Benchmark ScientificC1005-T5-ST
Nanopartículas de óxido de magnesioUS Research Nanomaterials, IncStock #:  US3310      MMgO, 99+%, 20 nm
MS Semi-Micro BalanceMettler ToledoMS105D
Papel nitrocelulósicoFisherbrand09-801A
Placa de poliestireno de 12 pocillos sin tratamiento tisularMarca Falcon Corning 
Placa de poliestireno de 48 pocillos sin tratamiento tisularMarca Falcon Corning 
Placa de poliestireno de 96 pocillos sin tratamiento tisularMarca Falcon Corning 
Placa de Petri de 100 mmVWR470210-568
Placa de Petri, 15 mmFB0875713A
Fisherbrand VWRSP70P
Microscopía electrónica de barrido (SEM)TESCAN Vega3 SBH
SonicatorVWR97043-936
Centrífuga de sobremesaFisher ScientificaccuSpin Micro 17
Centrífuga de sobremesa Centrífuga Eppendorf 5430
Agar de soja trípticoMP1010617
Caldo de soja trípticoSigma-Aldrich22092-500G
espectrofotómetro UV-Vis TecanInfinite 200 PROhttps://lifesciences.tecan.com/plate_readers/infinite_200_pro
VWR Benchmark Incu-shaker 10LVWRN/A
Defracción de potencia de rayos X  PanalyticalN/APANalytical Empyrean Series 2
351143351178351172 Medidor de pH de

Referencias

  1. Haque, M., Sartelli, M., McKimm, J., Abu Bakar, M. Health care-associated infections - An overview. Infection and Drug Resistance. 11, 2321-2333 (2018).
  2. O'Connell, K. M. G. Combating multidrug-resistant bacteria: Current strategies for the discov....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Explorar más artículos

Nanopartículas antimicrobianasevaluación in vitroconcentración inhibitoria mínimaconcentración bactericidacocultivo directodilución en serieviabilidad bacterianananopartículas de óxido de magnesioactividad antimicrobiana contra MRSA