쥐의 Notexin-Induced Muscle Injury에 대한 Ding의 롤 방법 모방
Summary
이 프로토콜은 Ding의 롤 방법을 모방하고, 골격근 손상의 쥐 모델을 설정하고, 헤마톡실린-에오신 염색을 사용하여 손상된 조직의 병리를 관찰하고 효소 결합 면역 흡착 분석을 사용하여 혈청 손상 마커의 변화를 감지하는 간단한 장치를 설명합니다.
Abstract
Ding의 롤 방법은 중국 전통 마사지(Tuina) 클리닉에서 가장 일반적으로 사용되는 조작 중 하나이며 중국에서 가장 영향력 있는 현대 Tuina 조작 중 하나입니다. 그것은 한 손가락 선 장르에서 일반적으로 사용되는 전통적인 롤링 방법을 기반으로 하며 Ding의 롤 방법이라고 명명되었습니다. 항염증 및 혈액 순환 촉진 효과로 인해 Ding의 롤링 방법은 근육병증에 대한 건전한 치료 효과가 있습니다. 인간의 피부에 가해지는 힘의 영역이 넓기 때문에 Ding의 롤 방법은 쥐와 토끼와 같이 피부 면적이 작은 실험 동물에게 수행하기가 어렵습니다. 또한, 인체에 가해지는 투이나의 강도는 실험동물에게 가해지는 강도와 다르기 때문에 실험 중 투이나의 치료 효과를 얻기에는 강도가 너무 높거나 낮을 수 있습니다. 이 실험은 Ding의 롤링 조작 매개변수(강도, 빈도, Tuina 지속 시간)를 기반으로 쥐에게 적합한 간단한 마사지기를 만드는 것을 목표로 합니다. 이 장치는 동물 실험에서 조작을 표준화하고 주관적인 요인으로 인해 다른 동물에 적용되는 Tuina 힘의 변화를 줄일 수 있습니다. 노텍신에 의한 골격근 손상의 쥐 모델을 확립하고, 혈장 손상 마커인 크레아틴 키나아제(CK) 및 지방산 결합 단백질 3(FABP3)를 사용하여 골격근 손상에 대한 투이나의 치료 효과를 평가했습니다. 결과는 이 Tuina 마사지기가 CK 및 FABP3 발현 수준을 줄이고 골격근 손상 정도를 늦출 수 있음을 보여주었습니다. 따라서 여기에 설명된 Ding의 롤 방법을 모방한 Tuina 마사지기는 실험 연구에서 Tuina 조작을 표준화하는 데 기여하고 근육병증에 대한 Tuina의 분자 메커니즘에 대한 후속 연구에 큰 도움이 됩니다.
Introduction
근육 손상은 임상 및 일상 생활에서 흔히 발생하는 외상성 부상으로, 외부 타격(타박상) 또는 근섬유의 만성적인 과긴장(긴장) 등으로 인해 근육 기능 장애와 통증을 유발하고 환자의 삶의 질에 심각한 영향을 미치기도 합니다1. 급성 긴장 장애 후 가능한 한 빨리 재활을 시작하는 것이 스포츠 복귀 시간을 단축하는 열쇠입니다2 통증을 줄이는 열쇠 3,4. 현대 서양 의학에서 근육 손상에 대한 임상적 응급처치는 근육 조직으로의 유해한 출혈을 막기 위해 휴식, 얼음찜질, 압박 및 상승(RICE)의 원칙을 따르며5 통증을 완화하기 위해 비스테로이드성 항염증제6를 사용한다. 엑소좀(exosome)7 및 조직공학(tissue engineering)8과 같은 새로운 치료법의 발견은 골격근 질환에 대한 잠재적인 치료 전략이 되었으며, 기존 약리학적 치료법의 단점을 보완했습니다. 그러나 이는 환자의 치료 비용을 증가시켜 엄청난 재정적 압박을 가할 수 있다9. 따라서 근골격계 질환을 치료하기 위해 대체 및 보완 요법이 권장된다10. Tuina는 중국에서 전통 의학 방법으로 임상적으로 널리 사용되며 효능과 부작용이 적어 환자들 사이에서 인기가 있습니다. 근골격계 질환에 대한 투이나 요법은 통증을 완화하고 기능을 향상시킬 수 있다11,12,13. 상하이 투이나(Tuina)의 유명한 수련자인 딩지펑(Ding Jifeng) 씨는 딩의 롤 방법14를 창시했습니다. 넓은 힘 면적, 균일하고 부드러운 힘, 강렬한 침투력을 가진 독특한 압연 및 분쇄 기술입니다.
다른 동물 모델은 다른 병인을 기반으로합니다. 장점과 단점이 있으며, 정확하고 적절한 동물 모델을 선택하는 것은 골격근 손상 후 재생 및 복구의 세포 및 분자 신호 전달 경로를 이해하여 골격근 질환 치료를 위한 새로운 치료법을 개발하는 데 도움이 되는 기본 실험에 매우 중요합니다. 근육 손상의 화학적 유도 모델이 널리 사용되며, 골격근 주사는 근섬유 괴사를 유발하고 2주 이내에 효과적으로 재생될 수 있는 재생 부위를 생성한다15. 노텍신과 부피바카인은 모두 근육 손상을 일으킬 수 있습니다. 그러나 노텍신은 부피바카인보다 골격근에 더 심각한 근독성 손상을 일으킬 수 있으며, 자연적인 기능 회복은 상대적으로 느리다16. 약물 근육 사출 성형은 시간이 덜 걸릴 뿐만 아니라 골격근 손상의 효과와 정도를 제어합니다. 이 정량화 가능한 제어는 성공적인 성형을 덜 어렵게 만듭니다15,17.
염증 반응은 근병증의 맥락에서 광범위하게 연구된 필수적인 생물학적 반응이다18,19. 골격근 손상의 초기 단계에서 근섬유 괴사는 국소 근육 항상성을 방해하고 많은 염증 세포가 손상 부위에 침투하여 많은 전염증성 사이토카인을 분비한다19. 크레아틴 키나아제(CK)는 골격근 손상을 평가하기 위한 전통적인 혈청 바이오마커입니다. 그러나 조직 특이성(tissue specificity)20 및 민감도(sensitivity)21가 부족하여 약물에 의한 근육 손상의 정도를 평가하고 부상 후 근육 회복 정도를 간접적으로 보고하는 능력이 제한된다. 지방산 결합 단백질 3(FABP3)를 포함한 새로운 바이오마커는 최근 골격근 손상의 설치류 모델에서 상대적으로 높은 조직 특이성과 민감도를 보여주었습니다. FABP3는 주로 심장 및 골격근 세포에서 발현되는 결합 단백질군이며 지방산 대사, 수송 및 신호 전달에 관여합니다22. 따라서 노텍신으로 인한 골격근 손상 및 치료 후 회복 정도를 평가하기 위해 CK와 FABP3의 두 가지 바이오마커 조합을 선택했습니다.
설치류의 경우 근육이 얕고 피부 면적이 작기 때문에 설치류의 다양한 마사지 매개 변수가 동물 치료와 같이 인간과 동일하지 않을 것으로 판단되며, 마사지 치료사는 Ding의 롤 방법을 사용하여 적은 힘으로 치료해야하며 부상 부위의 크기가 작기 때문에이 기술의 작동에 도움이되지 않을 수 있습니다. 이는 궁극적으로 마사지의 효과를 감소시킬 수 있습니다. 따라서 실험은 Ding의 롤링 방법의 특성에 부합하는 자체 제작 롤링 마사지기를 활용하여 쥐에서 노텍신 유도 골격근 손상 모델의 치료 효과를 개입하고 평가하여 실험 동물 연구에서 Tuina의 매개 변수를 표준화하여 Tuina의 분자 작용 메커니즘을 심층적으로 조사하고, 근골격계 질환에 대한 한의학 치료 방법.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기서는 쥐의 골격근 손상에 대한 Tuina 치료 프로토콜을 설명한 후 치료 후 골격근 손상 정도를 분석하여 방법의 효과를 검증했습니다. 특히, 약물 유도(notexin, bupivacaine)16, 둔기 타박상(blunt contusion)26, 크러쉬(crush)27 및 허혈-재관류(ischemia-reperfusion)28를 포함하되 이에 국한되지 않는 쥐 골격근 손상 모델이 Tuina와 함께 개입할 수 있다.<sup class="xr…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단(보조금 번호 82174521), 후난 중의학 대학 대학원생을 위한 혁신 프로젝트(2022CX109)의 보조금으로 지원되었습니다.
Materials
| 1 mL syringe | JIANGXI FENGLIN | 20220521 | |
| 1.5 microtubes | Servicebio | EP-150X-J | |
| 15 mL centrifuge tube | Servicebio | EP-1501-J | |
| 30G needle | CONPUVON | 220318 | |
| 5 mL blood collection tube | Servicebio | QX0023 | |
| Acrylic handle | Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd | 65643645 | |
| Adjustment splint | CREROMEM | 20220729 | |
| Cotton Swab | INOHV | 22080215 | |
| Enzyme-labeled Instrument | Rayto | RT-6100 | |
| Ethanol | INOHV | 211106 | |
| Fork holder | Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd | JL001 | |
| Hair removal cream | Veet, France | LOTC190922002 | |
| Hematoxylin dyeing solution set | Wuhan Google Biotech | G1005 | |
| Imaging system | Nikon, Japan | Nikon DS-U3 | |
| IODOPHOR disfecting solution | Hale&Hearty | 20221205 | |
| Light microscope | Nikon, Japan | Nikon Eclipse E100 | |
| Limit baffle | CREROMEM | 20220724 | |
| Notexin | Latoxan S.A.S. | L8104-100UG | |
| Pentobarbital sodium | Merck KGaA | P3761 | |
| Rat creatine kinase (CK) ELISA kit | LunChangShuoBiotech | YD-35237 | |
| Rat fatty acid-binding protein 3 (FABP3) ELISA kit | LunChangShuoBiotech | YD-35730 | |
| Rubber roller | Hebei Mgkui Chemical Technology Co.,Ltd | 202207 | |
| Screw | Weiyan Hardware | B05Z122 | |
| Sprague Dawley rats | Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co. | SYXK2019-0009 | |
| Spring | Bingzhang Hardware | TH001 | |
| Surgical blade | Covetrus | #23 | |
| Weigh controller | Iyoys | HY-XSQ |
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