Изготовление Амперометрический Электроды
Summary
Этот протокол описывает, как создавать электроды углеродного волокна. Электроды в дальнейшем использоваться для обнаружения катехоламинов освобождение от пузырьков с углекислым amperometry волокна.
Abstract
Электроды из углеродного волокна имеют решающее значение для выявления выпуска катехоламинов из везикул в одиночных камерах для amperometry измерений. Здесь мы описываем методы, необходимые для создания низкий уровень шума (<0,5 мкА) электроды. Методы были изменены из опубликованных описаний предыдущими исследователями (1,2). Электроды изготавливаются путем подготовки углеродных волокон и резьбы по отдельности в каждом капилляре с помощью вакуума с фильтром для аспирации волокна. Далее, капиллярная трубка с волокна, запряженных электрода съемник, создавая две половины, каждая из которых тонкой заостренной верхушкой. Электроды, смоченным в горячей, жидкой эпоксидной смешивается с отвердителем для создания стеклотекстолита печатью. Наконец, электроды помещаются в печь, чтобы вылечить эпоксидной смолы. Тщательная обработка электродов имеет решающее значение для обеспечения того, чтобы они сделаны последовательно и без повреждений. Этот протокол показывает, как изготовить и сократить амперометрического электроды для записи от отдельных клеток.
Protocol
Discussion
Этот протокол описывает, как создавать и сократить амперометрического электродов. Во время амперометрического записей, электрод из углеродного волокна помещают на поверхность секреторных клеток. Exocytotic активность наблюдается как амперометрического шипы, который показывает текущее ?…
Acknowledgements
Мы благодарим д-р Аарон П. Фокс в Чикагском университете, в лаборатории которого этот протокол был первоначально разработан, и Уильям Роден (Saint Louis University) для дальнейшего развития протокола.
Мы благодарим Фонд Уайтхолл и Национальный научный фонд для поддержки.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes | Reagent | Sigma Aldrich | P23954-100G04 716AJ | Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light. |
| Carbon Fibers | Material | Goodfellow | C005725 | |
| Micro-Hematocrit Capillary Tubes | Material | Fisher | NC9836768 | |
| Epoxy Resin | Reagent | Miller-Stephenson | Epon Resin 828 | |
| Dissecting Microscope | Instrument | |||
| Electrode Puller | Instrument | Narishige Japan | PP-830 | 1st pull = 24.8 degrees C; 2nd pull = 62.7 degrees C |
| Oven | Instrument | set to 100 degrees F. | ||
| Hot plate | Instrument | set to 55 degrees C |
References
- Mundorf, M. L., Wightman, R. M. Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells. Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).
- Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. Good practices in single-cell amperometry. Methods in Molec. Biol. 440, 297-313 (2008).
