Amperometrik Elektrotlar imalatı
Summary
Bu protokol, karbon fiber elektrotlar oluşturmak anlatılmaktadır. Bu elektrotlar daha sonra, karbon fiber amperometri ile veziküller katekolamin sürüm algılamak için kullanılır.
Abstract
Karbon fiber elektrotlar amperometri ölçümler için tek hücre veziküller katekolamin salınımının tespiti için çok önemlidir. Burada, düşük gürültü (<0,5 pA) elektrotlar üretmek için gerekli teknikler açıklanmaktadır. Teknikleri önceki araştırmacıların (1,2) tarafından yayınlanan açıklamaları modifiye edilmiştir. Elektrotlar karbon elyaf hazırlama ve lif aspire bir filtre ile vakum kullanarak her kapiller tüpe ayrı ayrı iş parçacığı tarafından yapılır. Sonra, fiber ile kılcal tüpü ince sivri ucu ile iki yarısı, her bir elektrot çektirmenin tarafından çekilir. Elektrotlar sıcak, sıvı epoksi, epoksi-cam bir mühür oluşturmak için sertleştirici ile karışık batırılmış. Son olarak, epoksi kür için bir fırın elektrotlar yerleştirilir. Elektrotlar dikkatli kullanımı, tutarlı bir şekilde ve zarar vermeden yapılır sağlamak için kritik öneme sahiptir. Bu protokol tek hücre kayıt için amperometrik elektrotlar imal ve nasıl kesileceğini gösterir.
Protocol
Discussion
Bu protokol amperometrik elektrotlar oluşturmak ve nasıl kesileceği açıklanmıştır. Amperometrik kayıtları sırasında, karbon fiber bir elektrot bir salgı hücre yüzeyine karşı yerleştirilir. Exocytotic faaliyet katekolamin oksidasyonu sonra elektron transferi ile oluşan elektrokimyasal akım gösterir amperometrik ani olarak görülmektedir. Pratik yapma ve kesme amperometrik elektrotlar sayesinde, piyasada bulunan elektrotlar pek çok üzerinde gürültü seviyeleri büyük ölçüde geliştirilmiş ol…
Acknowledgements
Bu protokol başlangıçta tasarlanmış olan laboratuar, Chicago Üniversitesi'nde Dr. Aaron P. Fox teşekkür eder, ve daha da geliştirilmesi için protokol William Roden (Saint Louis Üniversitesi).
Biz Whitehall Vakfı, Ulusal Bilim Vakfı ve destek için teşekkür ederiz.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes | Reagent | Sigma Aldrich | P23954-100G04 716AJ | Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light. |
| Carbon Fibers | Material | Goodfellow | C005725 | |
| Micro-Hematocrit Capillary Tubes | Material | Fisher | NC9836768 | |
| Epoxy Resin | Reagent | Miller-Stephenson | Epon Resin 828 | |
| Dissecting Microscope | Instrument | |||
| Electrode Puller | Instrument | Narishige Japan | PP-830 | 1st pull = 24.8 degrees C; 2nd pull = 62.7 degrees C |
| Oven | Instrument | set to 100 degrees F. | ||
| Hot plate | Instrument | set to 55 degrees C |
References
- Mundorf, M. L., Wightman, R. M. Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells. Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).
- Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. Good practices in single-cell amperometry. Methods in Molec. Biol. 440, 297-313 (2008).
