تصنيع أقطاب Amperometric
Summary
هذا البروتوكول يصف كيفية توليد كهربائية من الألياف الكربونية. تستخدم لاحقا لكشف الأقطاب الافراج الكاتيكولامينات من الحويصلات مع amperometry ألياف الكربون.
Abstract
أقطاب من ألياف الكربون ذات أهمية حاسمة للكشف عن الافراج الكاتيكولامينات من الحويصلات في الخلايا واحد للقياسات amperometry. هنا ، نحن تصف التقنيات اللازمة لتوليد ضوضاء منخفضة (<0.5 سنويا) الأقطاب الكهربائية. تم تعديل التقنيات من الأوصاف التي نشرها الباحثون السابقة (1،2). أقطاب كهربائية مصنوعة من خلال إعداد ألياف الكربون والترابط بشكل فردي في كل أنبوب شعري باستخدام فراغ مع فلتر لنضح الألياف. المقبل ، ويتم سحب الأنبوب الشعري ، مع الألياف عن طريق مجتذب الكهربائي ، وخلق نصفين ، مع كل طرف غرامة مدببة. وتراجع الأقطاب في الايبوكسي ، والساخنة السائل مختلطة مع تصليب لإنشاء ختم الايبوكسي من الزجاج. أخيرا ، يتم وضع الأقطاب الكهربائية في الفرن لعلاج الايبوكسي. معالجة متأنية لأقطاب أمر بالغ الأهمية لضمان انها مصنوعة باستمرار ودون أضرار. هذا البروتوكول يوضح كيفية تلفيق وقطع كهربائية amperometric لتسجيل واحدة من الخلايا.
Protocol
Discussion
هذا البروتوكول يصف كيفية توليد كهربائية وقطع amperometric. خلال التسجيلات amperometric ، يتم وضع قطب كهربائي من ألياف الكربون على سطح الخلايا الإفرازية. وقد لوحظ نشاط Exocytotic والتموج amperometric ، مما يدل على الكهروكيميائية الحالية الناجمة عن نقل الإلكترونات بعد أكسدة الكاتيكولامينا…
Acknowledgements
نشكر الدكتور آرون P. فوكس في جامعة شيكاغو ، في المختبر الذي كان مصمما أصلا هذا البروتوكول ، وليم رودن (جامعة سانت لويس) لمزيد من تطوير بروتوكول
نشكر مؤسسة ايتهول والمؤسسة الوطنية للعلوم للحصول على الدعم.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes | Reagent | Sigma Aldrich | P23954-100G04 716AJ | Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light. |
| Carbon Fibers | Material | Goodfellow | C005725 | |
| Micro-Hematocrit Capillary Tubes | Material | Fisher | NC9836768 | |
| Epoxy Resin | Reagent | Miller-Stephenson | Epon Resin 828 | |
| Dissecting Microscope | Instrument | |||
| Electrode Puller | Instrument | Narishige Japan | PP-830 | 1st pull = 24.8 degrees C; 2nd pull = 62.7 degrees C |
| Oven | Instrument | set to 100 degrees F. | ||
| Hot plate | Instrument | set to 55 degrees C |
References
- Mundorf, M. L., Wightman, R. M. Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells. Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).
- Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. Good practices in single-cell amperometry. Methods in Molec. Biol. 440, 297-313 (2008).
