Drosophila larvali NMJ Immunoistochimica
Summary
Questo protocollo illustra come eseguire immunoistochimica su sezionato larva di Drosophila.
Abstract
Il<em> Drosophila</em> Giunzione neuromuscolare (NMJ) è stabilito un sistema modello utilizzato per lo studio dello sviluppo e della plasticità sinaptica. L'uso diffuso del<em> Drosophila</em> Motore del sistema è dovuta alla sua alta accessibilità. Può essere analizzati con cella singola risoluzione. Ci sono 30 muscoli per hemisegment la cui disposizione all'interno delle mura organo periferico sono noti. Un totale di 31 neuroni motori attribuiscono a questi muscoli in un modello che ha alta fedeltà. Utilizzando biologia molecolare e della genetica, si possono creare animali transgenici o mutanti. Poi, si può studiare le conseguenze dello sviluppo sulla morfologia e la funzione del NMJ. Immunoistochimica può essere usato per l'immagine chiaramente i componenti del NMJ. In questo articolo mostriamo come utilizzare colorazione anticorpi per visualizzare le<em> Drosophila</em> Larvale NMJ.
Protocol
Discussion
Immunoistochimica (IHC) è di vitale importanza per lo studio della biologia NMJ perché consente la visualizzazione delle NMJ. Questo è ottenuto utilizzando anticorpi che riconoscono la membrana neuronale (ad esempio, HRP), il presynapse (ad esempio, CSP, SYT), e / o il postsynapse (ad esempio, DLG). Molecole di segnalazione, proteine strutturali, nuove proteine o di interesse possono anche essere colorati. Poi, i geni possono essere mutati o missexpressed e IHC in grado di rilevare perturbazione di strutt…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 000000-1063-181 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | ||
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | ||
| Adams™ Nutator Mixer | Becton, Dickinson and Company | 421105 | ||
| No.1 Precision knife | X-Acto | 3201 | ||
| No. 16 Blades | X-Acto | 216 | ||
| ProLong Gold Antifade reagent | Invitrogen Corporation | 36930 |
References
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Collins, C. A., DiAntonio, A. Synaptic development: insights from Drosophila. Curr Opin Neurobiol. 17 (1), 35-42 (2007).
