एफएम लेबल का प्रयोग न्यूरॉन्स में exocytosis माप
Summary
पुटिका रिलीज के कैनेटीक्स को मापने की क्षमता neurotransmission की मूल बातें की कुछ अंतर्दृष्टि प्रदान में मदद कर सकते हैं. यहाँ हम लाल फ्लोरोसेंट डाई 4-64 एफएम के साथ लेबल hippocampal neuronal संस्कृतियों में presynaptic पुटिका रिहाई की दर को मापने के vesicles की वास्तविक समय इमेजिंग इस्तेमाल किया.
Abstract
पुटिका रिलीज के कैनेटीक्स को मापने की क्षमता neurotransmission की मूल बातें की कुछ अंतर्दृष्टि प्रदान में मदद कर सकते हैं. यहाँ हम एफएम डाई के साथ लेबल presynaptic पुटिका रिहाई की दर पर नजर रखने के vesicles की वास्तविक समय इमेजिंग इस्तेमाल किया. FM4-64 एक लाल फ्लोरोसेंट amphiphilic styryl डाई है कि synaptic vesicles की झिल्ली में embeds endocytosis के रूप में प्रेरित है. Lipophilic बातचीत डाई बहुत प्रतिदीप्ति में वृद्धि करने के लिए, इस प्रकार एक उज्ज्वल संकेत उत्सर्जन जब vesicles और एक नाममात्र कोशिकी द्रव में जब के साथ जुड़े कारण हैं. एक धोने के बाद कदम के प्लाज्मा झिल्ली के भीतर बाहरी डाई हटाने में मदद करने के लिए प्रयोग किया जाता है, शेष एफएम vesicles के भीतर केंद्रित है और फिर से निष्कासित कर दिया, जब exocytosis बिजली की उत्तेजना के दूसरे दौर से प्रेरित है. vesicles के रिलीज की दर प्रतिदीप्ति जिसके परिणामस्वरूप में कमी से मापा जाता है. चूंकि एफएम डाई बाह्य लागू किया जा सकता है और transiently, यह neuronal संस्कृतियों में exocytosis की दरों का निर्धारण करने के लिए एक उपयोगी उपकरण है, खासकर जब ट्रांसफ़ेक्ट synapses और पड़ोसी नियंत्रण BOUTONS के बीच दरों की तुलना.
Protocol
Discussion
के रूप में 300 कार्रवाई क्षमता (ए पी एस) पुटिका रीसाइक्लिंग के एक दौर, कम से कम 300 APs या अधिक बार vesicles की रीसाइक्लिंग पूल लेबल दिया जाता है की एक लोड हो रहा है उत्तेजना पैदा करने के लिए पर्याप्त है. हालांकि अधिक तीव्र 900 APs …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| APV | Sigma | A5282 | ||
| FM 4-64 | Molecular Probes | T-3166 | ||
| CNQX disodium salt | Sigma | C-239 |
References
- Betz, W. J., Bewick, G. S. Optical analysis of synaptic vesicle recycling at the frog neuromuscular junction. Science. 255, 200-203 (1992).
