Объективы развития предполагает взаимодействие с другими тканями. Несколько мутантов глаз данио рерио характеризуются аномально малый размер объектива. Здесь мы показываем, эксперимент объектив трансплантации определить, является ли этот фенотип из-за внутренних причин или дефектные взаимодействия с тканями, которые окружают линзы.
Abstract
Линзы играет важную роль в развитии глазного бокала [1,2]. Использование данио, как модель организма, вопросы, касающиеся развития линзы могут быть решены. Данио полезно для генетических исследований из-за нескольких выгодных характеристик, в том числе небольшие размеры, высокую плодовитость, короткий жизненный цикл, и простота ухода. Объективы развитие происходит быстрее в данио. К 72 HPF, данио рерио линза функционально зрелые [3]. Обильные генетические и молекулярные ресурсы для поддержки исследований в данио. Кроме того, сходство данио глаз, чтобы у других позвоночных, обеспечивает основу для ее использования в качестве отличной моделью животным человеческие пороки [4-7]. Несколько мутантов данио выставку объектив аномалий, включая высокий уровень гибели клеток, которые в некоторых случаях приводит к полной дегенерации тканей линзы [8].
Для определения того, объектив отклонения из-за внутренних причин или дефектные взаимодействия с окружающими тканями, трансплантация мутант линзы в дикого типа глаз не выполняется. Использование пожарной полированного металла иглы, мутант или дикого типа линз тщательно расчлененный от донора животное, и переданы в хосте. Чтобы отличить дикого типа и мутантных тканей, трансгенной линии используется в качестве донора. Эта линия выражает мембраной GFP во всех тканях, в том числе линза. Этот метод трансплантации является важным инструментом в изучении мутантов данио линзы.
Protocol
Часть 1: Подготовка эмбрионов В этом протоколе, мы будем использовать символ JJ ху для обозначения гипотетической мутант объектив рыбок данио. Данио рерио штаммов ведутся в стандартных условиях объекта рыбы на 28,5 С на 14h light/10h темно цикла. Вечером, место м?…
Discussion
Несколько шагов требуют особого внимания при смене объективов трансплантации.
Заостренный игл: Лучше подготовить несколько игл перед проведением трансплантации линзы, а кончик иглы должны быть как можно тоньше. Толстая игла порвется больше ткани из-за его более широкий диамет?…
Acknowledgements
Эта процедура следует в значительной степени технику трансплантации, разработанные для пещера рыбы лаборатории Билл Джеффри.
Zhang , Y., McCulloch, K., Malicki, J. Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants. J. Vis. Exp. (28), e1258, doi:10.3791/1258 (2009).