השתלת עדשה של דג הזברה Application שלה ניתוח של מוטאנטים העין
Summary
העדשה כוללת פיתוח אינטראקציות עם רקמות אחרות. מספר מוטציות עין דג הזברה מתאפיינים בגודל העדשה קטן באופן חריג. כאן אנו מדגימים השתלת עדשה הניסוי כדי לקבוע אם פנוטיפ זה נובע גורם פנימי או אינטראקציות עם רקמות פגומות המקיפים את העדשה.
Abstract
העדשה משחק תפקיד חשוב בהתפתחות של כוס הראייה [1,2]. השימוש דג הזברה כמודל אורגניזם, שאלות לגבי התפתחות העדשה ניתן לטפל. דג הזברה הוא שימושי עבור מחקרים גנטיים בשל יתרון מאפיינים, ובהם גודל קטן, פוריות גבוהה, מחזור חיים קצר, וקלות לטיפול. פיתוח עדשה מתרחשת במהירות דג הזברה. עד hpf 72, העדשה דג הזברה הוא בוגר תפקודית [3]. משאבים גנטיים מולקולריים שופע זמינים כדי לתמוך במחקר דג הזברה. בנוסף, הדמיון של העין דג הזברה לאלה של חוליות אחרים מספק בסיס השימוש בו במודל חיה מעולה של פגמים אנושיים [4-7]. מוטנטים דג הזברה מספר מפגינים ליקויים העדשה, כולל רמות גבוהות של מוות של תאים, אשר בחלק מהמקרים גורמת לניוון מוחלט של רקמות העדשה [8].
כדי לקבוע אם הפרעות העדשה הן בשל גורם פנימי או פגום אינטראקציות עם הרקמות הסובבות, השתלת עדשה לתוך העין מוטציה wild-type מבוצע. באמצעות אש מלוטש מחטים מתכת, עדשות מוטנטי או wild-type הם גזור בקפידה מן החי התורם, והועבר לתוך המארח. כדי להבדיל בין הרקמות wild-type ו – מוטציה, קו מהונדס משמש התורם. קו זה מבטא קרום הנכנס GFP ברקמות, כולל העדשה. טכניקה זו השתלה היא כלי חיוני במחקרים של מוטנטים דג הזברה העדשה.
Protocol
Discussion
צעדים אחדים דורשים תשומת לב מיוחדת במהלך השתלות העדשה.
- חידד מחטים: עדיף להכין מחטים מספר לפני ביצוע השתלת עדשה, וקצה מחטים צריך להיות דק ככל האפשר. מחט עבה יקרע רקמות יותר בגלל קוטר רחב יותר שלה, גורם לכישלון בעין לרפא…
Acknowledgements
הליך זה כדלקמן במידה רבה את טכניקת השתלת שפותחה עבור דג המערה על ידי המעבדה של ביל ג'פרי.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
References
- Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens. Dev Biol. 231, 63-76 (2001).
- Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. Central role for the lens in cave fish eye degeneration. Science. 289, 631-633 (2000).
- Easter, S. S., Nicola, G. N. The development of vision in the zebrafish(Danio rerio). Dev Biol. 180, 646-663 (1996).
- Schmitt, E., Dowling, J. Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio. J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).
- Malicki, J. Harnessing the power of forward genetics–analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina. Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).
- Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish. Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).
- Avanesov, A., Malicki, J. Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina. Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).
- Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects. Vision Res. 42, 535-540 (2002).
- Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina. Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).
