Summary

Conoscere ciò che conta: stereologia Tutti nel settore non umano cervello dei primati

Published: May 14, 2009
doi:

Summary

L'organizzazione anatomica del cervello dei primati in grado di fornire spunti importanti in condizioni normali e patologiche nell'uomo. Tutti stereologia è un metodo per precisione ed efficienza stimare il numero totale dei neuroni (o tipo di cellula) in uno spazio di riferimento dato<sup> 1</sup>.

Abstract

Il primate non umano è una specie importante traslazionale per la comprensione dei processi di normale funzione e malattie del cervello umano. Stereologia imparziali, il metodo accettato come state-of-the-art per la quantificazione di oggetti biologici in sezioni di tessuto<sup> 2</sup>, Genera affidabili dati strutturali per le caratteristiche biologiche del cervello dei mammiferi<sup> 3</sup>. I componenti chiave dell'approccio sono obiettive (sistematico-casuale) il campionamento di strutture anatomicamente definito (spazi di riferimento), combinata con la quantificazione del numero di cellule dimensioni e lunghezze, fibre e capillari, superfici, volumi regionali e distribuzione spaziale degli oggetti biologici all'interno del riferimento spazio<sup> 4</sup>. Tra i vantaggi di questi approcci stereological rispetto ai metodi precedenti è quello di evitare tutte le fonti conosciute di errore sistematico (non casuale) derivanti da assunzioni errate e non verificabili modelli. Questo studio documenta una applicazione biologica di stereologia computerizzati per stimare la popolazione neuronale nella corteccia frontale del cervello della scimmia cercopiteco (<em> Chlorocebus aethiops sabeus</em>), Con l'assistenza di due programmi stereologia disponibili in commercio, Scienze della Vita e BioQuant Stereologer (Figura 1). Oltre a contrasto e il confronto dei risultati sia dal BioQuant e<em> Stereologer</em> Sistemi, questo studio fornisce un protocollo dettagliato per la<em> Stereologer</em> Sistema.

Protocol

Parte 1: Pre-trattamento dei tessuti deve essere fatto secondo Burke et al. (2009) 5. In breve, il tessuto deve essere ben perfusi con paraformaldeide, glutaraldeide, o formalina. Questo può essere raggiunto attraverso standard di perfusione transcardial tipicamente usato per raccogliere altri organi. Nel presente studio il soggetto era profondamente sedato con cloridrato di ketamina (10 mg / kg, im), eutanasia con una dose eccessiva di sodio pentobarbital (25 mg / kg, iv) e perfusi transcardially…

Discussion

Stereologia Tutti in un cervello dei primati è simile a quella di altri campioni biologici. Tuttavia, date le dimensioni del cervello dei primati, un piano di trattamento è raccomandato un attento quanto un singolo emisfero della scimmia cercopiteco produce più di 1200 sezioni al taglio a 50 micron. In primo luogo si consiglia stereotaxically bloccare il cervello in blocchi 1 cm, che fornisce un piano standard di sezione tra blocchi e soggetti, minimizza le sezioni parziali tra i blocchi, e fornisce gestibile blocchi…

Acknowledgements

Gli autori desiderano ringraziare Ikiel Ptito per il suo continuo supporto tecnico. NSERC concedere a MP.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Stereologer   Stereology Resource Center (Chester, MD) www.disector.com  
Stereology Tool-Kit Stereologer system   BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)    
StereoInvestigator   MicroBright Field (Willston, VT)    

References

  1. West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator. Aat Rec. 231, 482-497 (1991).
  2. Saper, C. B. Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods. J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).
  3. Sterio, D. C. The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector. J Microsc. 134, 127-136 (1984).
  4. Mouton, P. R. . Principles and Practices of Unbiased Stereology. , (2002).
  5. Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space. J Vis Exp. 29, (2009).
  6. Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Brain banking: Making the most of your research. J Vis Exp. 29, (2009).
  7. Manaye, K. F., Wang, P., O’Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry. AGE. 29, 87-96 (2009).
  8. Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure. Neuroreport. 20, 13-17 (2009).
  9. Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain. J Vis Exp. 29, (2009).
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Citer Cet Article
Burke, M., Zangenehpour, S., Mouton, P. R., Ptito, M. Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain. J. Vis. Exp. (27), e1262, doi:10.3791/1262 (2009).

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