Summary

非ヒト霊長類の脳の公平な立体学を:大切なのを知ること

Published: May 14, 2009
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Summary

霊長類の脳の解剖学的組織は、ヒトの正常と病理学的状態に重要な洞察を提供することができます。公平な立体学が正確かつ効率的に所定の基準空間の合計ニューロンの数を(または他の細胞型)を推定するための方法です。<sup> 1</sup>。

Abstract

ヒト以外の霊長類はヒトの脳の正常機能と疾患のプロセスを理解する上で重要な並進種です。公平な立体学、組織切片における生物学的なオブジェクトの定量化のための最先端のように受け入れられる方法<sup> 2</sup>、哺乳類の脳の生物​​学的機能の信頼性の高い構造データを生成します。<sup> 3</sup>。アプローチの主要なコンポーネントは、公平であり内のセルの番号とサイズ、繊維と毛細管の長さ、表面積、地域のボリュームと生物学的オブジェクトの空間分布の定量化と組み合わせて解剖学的に定義された構造(基準空間)、の(体系的ランダム)サンプリング基準空間<sup> 4</sup>。以前の方法に比べてこれらの立体的なアプローチの利点は、障害のある仮定と非検証可能なモデルに起因する系統的な(非ランダム)エラーの既知のすべての源の回避です。本研究では、ベルベットモンキーの脳の前頭皮質における総神経人口を推定するためにコンピュータ化された立体学の生物学的応用について説明(<em> Chlorocebus aethiops sabeus</em>)、2つの市販の立体学プログラム、BioQuantライフサイエンスとStereologer(図1)から支援を受けて。コントラストとBioQuant両方の結果の比較とに加え、<em> Stereologer</em>システム、本研究では、の詳細なプロトコルを提供します。<em> Stereologer</em>システム。

Protocol

パート1:組織の前処理が行われるのは、Burkeらによると行う必要があります。 (2009)5。 簡単に言えば、組織はよくパラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、またはホルマリンで灌流してください。これは通常、他の臓器を収穫するために使用される標準transcardial灌流によって達成することができます。本研究では被験者は深く、(10 mg / kgを、IM)塩酸ケタミンで鎮静し…

Discussion

霊長類の脳における公平な立体学は、他の生体試料のそれと似ています。しかし、霊長類の脳の大きさを考えると、慎重な処理計画が50μmの時にスライスするときにベルベットモンキーの単一の半球は、1200以上のセクションをもたらすので、推奨されます。まず、定位、ブロックおよびサブジェクト間のセクションの標準的な平面を提供するブロック間の部分的なセクションを最小限に抑え?…

Acknowledgements

著者は、彼の継続的な技術サポートのためにIkiel Ptitoに感謝します。 MPにNSERC助成金。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Stereologer   Stereology Resource Center (Chester, MD) www.disector.com  
Stereology Tool-Kit Stereologer system   BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)    
StereoInvestigator   MicroBright Field (Willston, VT)    

References

  1. West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator. Aat Rec. 231, 482-497 (1991).
  2. Saper, C. B. Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods. J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).
  3. Sterio, D. C. The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector. J Microsc. 134, 127-136 (1984).
  4. Mouton, P. R. . Principles and Practices of Unbiased Stereology. , (2002).
  5. Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space. J Vis Exp. 29, (2009).
  6. Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Brain banking: Making the most of your research. J Vis Exp. 29, (2009).
  7. Manaye, K. F., Wang, P., O’Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry. AGE. 29, 87-96 (2009).
  8. Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure. Neuroreport. 20, 13-17 (2009).
  9. Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain. J Vis Exp. 29, (2009).
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Citer Cet Article
Burke, M., Zangenehpour, S., Mouton, P. R., Ptito, M. Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain. J. Vis. Exp. (27), e1262, doi:10.3791/1262 (2009).

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