Sabendo o que conta: Estereologia Imparcial no cérebro de primatas não humanos
Summary
A organização anatômica do cérebro dos primatas podem fornecer importantes insights sobre condições normais e patológicas nos seres humanos. Estereologia imparcial é um método para estimar com precisão e eficiência o número de neurônios total (ou outro tipo de célula) em um espaço de referência dado<sup> 1</sup>.
Abstract
O primata não-humano é uma importante espécie de translação para a compreensão dos processos normais de funcionamento e as doenças do cérebro humano. Estereologia imparciais, o método aceito como o estado-da-arte para a quantificação de objetos biológicos em cortes de tecido<sup> 2</sup>, Gera dados confiáveis estruturais para os recursos biológicos no cérebro de mamíferos<sup> 3</sup>. Os componentes-chave da abordagem são imparciais (aleatória sistemática) de amostragem de estruturas anatomicamente definidos (espaços de referência), combinado com a quantificação de números de celular e comprimentos de fibra tamanho e capilar, superfícies, volumes regionais e distribuição espacial de objetos biológicos dentro do espaço de referência<sup> 4</sup>. Entre as vantagens dessas abordagens sobre os métodos estereológicos anterior é a prevenção de todas as fontes conhecidas de erro sistemático (não aleatória) decorrentes de pressupostos errôneos e não verificáveis modelos. Este estudo documenta uma aplicação biológica de estereologia computadorizado para estimar o total da população neuronal no córtex frontal do cérebro do macaco vervet (<em> Chlorocebus aethiops sabeus</em>), Com a ajuda de dois programas estereologia comercialmente disponíveis, Ciências da Vida e BIOQUANT Stereologer (Figura 1). Além de contraste e comparação dos resultados de ambos os BIOQUANT e<em> Stereologer</em> Sistemas, este estudo fornece um protocolo detalhado para o<em> Stereologer</em> Sistema.
Protocol
Discussion
Estereologia imparcial em um cérebro de primatas é semelhante ao de outras amostras biológicas. No entanto, dado o tamanho do cérebro dos primatas, um plano de tratamento cuidadoso é recomendado desde um único hemisfério do macaco vervet produz mais de 1.200 seções quando cortado em 50 micra. Em primeiro lugar recomendamos stereotaxically bloqueando o cérebro em blocos de um centímetro, que fornece um plano padrão de seção entre os blocos e assuntos, minimiza seções parcial entre blocos, e fornece blocos…
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer Ikiel Ptito por seu contínuo apoio técnico. NSERC conceder ao MP.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereologer | Stereology Resource Center (Chester, MD) | www.disector.com | ||
| Stereology Tool-Kit Stereologer system | BioQuant Life Sciences (Nashville, TN) | |||
| StereoInvestigator | MicroBright Field (Willston, VT) |
References
- West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator. Aat Rec. 231, 482-497 (1991).
- Saper, C. B. Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods. J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).
- Sterio, D. C. The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector. J Microsc. 134, 127-136 (1984).
- Mouton, P. R. . Principles and Practices of Unbiased Stereology. , (2002).
- Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space. J Vis Exp. 29, (2009).
- Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. Brain banking: Making the most of your research. J Vis Exp. 29, (2009).
- Manaye, K. F., Wang, P., O’Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry. AGE. 29, 87-96 (2009).
- Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure. Neuroreport. 20, 13-17 (2009).
- Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain. J Vis Exp. 29, (2009).
