小鼠乳腺上皮细胞形成过程中Lactogenic分化的微球体
Summary
HC11 lactogenic分化的特点可以简称为微球体的半球形结构的形成。相衬显微镜的结构可以枚举援助量化lactogenic分化。
Abstract
常用的表型措施，以确定在小鼠乳腺上皮细胞培养的lactogenic分化程度是圆顶形细胞结构的形成，被称为微球体<sup> 1</sup>。 HC11细胞系作为模型系统已受聘乳腺lactogenic分化调控的研究<em>在体外</em><em>在体内</em<sup> 2</sup>。 HC11细胞分化和综合lactogenic激素治疗牛奶蛋白。 HC11小鼠乳腺上皮合流细胞的生长，lactogenic分化诱导此外lactogenic激素，包括地塞米松，胰岛素和催乳素的组合，简称为DIP。 HC11细胞诱导分化的拍摄时间可达120个小时的分化诱导后的微球体出现在每一种文化，是列举。个人微球体的大小，分化程度相关，这是区分细胞的图像描绘。
Protocol
6天的RPMI 1640培养基中，10％小牛血清，5μg/ml胰岛素，10毫米的HEPES，在10ng/ml表皮生长因子（EGF），建立能力，HC11细胞生长汇合。 细胞用PBS洗涤，并保持24小时，在没有表皮生长因子生长介质。 为了诱导lactogenic分化的细胞培养分化的媒体，即地塞米松（10 -6 M）的RPMI，胰岛素（5微克/毫升）和催乳素（5微克/毫升），简称为DIP 。 在规定的时间后DIP此外，微球体进行了拍照，并列举…
Discussion
为了使这项技术获得成功，最好的质量，必须保持上皮细胞在合流之前被lactogenic激素诱导。有可能有无数的微球体，这使得难以量化的情况下。因此，定量的目的，最好在一个时间点拍摄时的微球体，能算的微球体。
虽然有各种分子标记，用于确定乳腺上皮细胞的lactogenic分化程度，有几个用于2D文化细胞生长的形态标记。上皮细胞单层的能力，形成微型穹顶结构，牛奶蛋白?…
Acknowledgements
从国会导演医学研究基金资助（DAMD17 – 01 – 0264）ML卡特勒和美国军事癌症研究所ML卡特勒的资金支持工作。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI | Invitrogen | 21870076 | ||
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | ||
| L-Glutamine | Gibco | 25030 | ||
| PenStrep | Gibco | 15140 | ||
| Hepes | Quality Biologicals | 118089060 | ||
| EGF | Sigma | E9644 | ||
| Insulin | Gibco | 12585-014 | ||
| Dexamethasone | Sigma | D1756 | ||
| Microscope | Olympus | IX71 | ||
| Digital Camera | QImaging | Retiga 2000RV Fast 1394 |
References
- Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells. Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).
- Wang, W. Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells. J Cell Physiol. 214, 38-46 (2008).
Citer Cet Article
Morrison, B., Cutler, M. L. Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation. J. Vis. Exp. (32), e1265, doi:10.3791/1265 (2009).