אנו מציגים הליך לגיבוש פולי (אתילן גליקול) עצמית התאספו monolayer (PEG-SAM) על מצע סיליקון עם microelectrodes זהב. PEG-SAM נוצר בשלב אחד ומונע Biofouling על משטחי סיליקון וזהב. אלקטרופורזה לאחר מכן נעשה שימוש עבור ביומולקולות דפוסים עד הננומטרי.
Abstract
אנו מציגים הליך לגיבוש פולי (אתילן גליקול) (PEG) monolayer trimethoxysilane עצמית התאספו (SAM) על מצע סיליקון עם microelectrodes זהב. PEG-SAM נוצר בשלב הייצור בודד ומונע Biofouling על משטחי סיליקון וזהב. SAM משמש microelectrodes מעיל עם הדפס ליתוגרפיה רגיל בטון חיובי,. שימוש microtubule כדוגמה, אנחנו מיישמים מתח DC לגרום הגירה electrophoretic אל האלקטרודה SAM מצופה באופן הפיך. תא זרימה משמש הדמיה ההגירה electrophoretic ו דפוסים microtubule<em> באתרו</em> באמצעות מיקרוסקופ epifluorescence. שיטה זו היא בדרך כלל החל על דפוסים biomolecule, כפי שהיא מעסיקה אלקטרופורזה לשתק מולקולות מטרה ולכן אינה דורשת אינטראקציות מולקולריות ספציפיות. יתר על כן, זה ימנע בעיות נתקלים כאשר מנסים דפוס מולקולות SAM ישירות באמצעות טכניקות ליתוגרפיות. תאימות עם קרן אלקטרונים ליתוגרפיה מאפשר בשיטה זו כדי לשמש ביומולקולות דפוס הננומטרי.
Protocol
הכנה של ריאגנטים הכן צינורות חיץ (80 צינורות מ"מ, 1mm MgCl 2, 1mm EGTA, מותאם pH 6.8 עם KOH). Aliquot וגלוקוז אוקסידאז חנות, Catalase וגלוקוז ב -70 ° C ו טקסול ב -20 מעלות צלזיוס על פי פרוטוקולים קיימים. Aliquot 1,2 ו טובולין חנות ב -70 ° C בהתאם להוראות ?…
Discussion
הגירה של MTS היא דמיינו בקלות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי בגלל הבהירות שלהם ואת הקרינה רקע נמוך. השיטה היא בדרך כלל החל על דפוסים biomolecule, כמו זה רק דורש כי ביומולקולות להיגרם לשאת מטען נטו על ידי התאמה של pH מתאים החיץ. Electroosmosis היא להימנע ההתקנה זה כי אין משטחים טעונים …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מכירים מליסה Grunlan לדיונים מועיל על היווצרות SAM. מחקר זה מומן בחלקו על ידי א 'רוברט וולטש קרן (A-1585).
No. 1 borosilicate glass coverslips (22 X 50 mm) were purchased from VWR. Polished electronic grade p-type <111> silicon wafers were purchased from Addison Engineering, Inc. High-purity silver paint was obtained from Structure Probe, Inc. (Catalog # 5001 AB). Insulated fine gauge copper magnet wire (~ 0.08 mm (0.003) diameter) can be obtained from electronic supply companies.
Noel, J., Teizer, W., Hwang, W. Antifouling Self-assembled Monolayers on Microelectrodes for Patterning Biomolecules. J. Vis. Exp. (30), e1390, doi:10.3791/1390 (2009).