Изоляция по правам артерии пуповины гладкомышечных клеток (HUASMC)
Summary
Пуповины используются для изоляции гладкомышечных клеток по-разному. В этой работе мы использовали ферментативный лечения изолированных гладкомышечных клеток.
Abstract
Человеческой пуповины (UC) является биологической пробы, которые могут быть легко получены сразу после рождения. Эта биологическая проба, большую часть времени, отбрасываются и их коллекции не предполагает какого-либо дополнительного риска для здоровья новорожденного или матери с. Кроме того никаких этических проблем подняты. UC состоит одна вена и две артерии, из которых как эндотелиальные клетки (ECS)<sup> 1</sup> И гладкие мышечные клетки (ГМК)<sup> 2</sup>, Два из основных компонентов клетки кровеносных сосудов, могут быть изолированы. В этом проекте ГМК были получены после ферментативной обработки артерий UC соответственно экспериментальной процедуры ранее описываемых Джаффе<em> И др.</em<sup> 3</sup>. После изолятор они находились в T-Flash с DMEM-F12 с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки и культивировали в течение нескольких пассажей. Клетки сохранили свои морфологические и другие фенотипические характеристики разных поколений. Целью данного исследования было изолировать клетки гладкой мускулатуры, чтобы использовать их в качестве моделей для будущих анализов с констриктор наркотиков, выделить и охарактеризовать структурно L-типа кальциевых каналов, изучать клеточные и молекулярные аспекты сосудистой функции<sup> 4</sup> И использовать их в тканевой инженерии.
Protocol
Discussion
SMC может быть использована в качестве модели для будущих анализов с констриктор наркотики, чтобы изолировать и структурно охарактеризовать L-типа кальциевых каналов, изучать клеточные и молекулярные аспекты сосудистую функцию и использовать их в тканевой инженерии. ГМК и этике имеют ?…
Acknowledgements
Больницы Амато Lusitano, Каштелу-Бранку Португалии.
Больницы Соуза Мартинс, Гуарда Португалии.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | ||
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom-AG | 0117T | ||
| RPMI 1640 | Gibco | 3103806 | ||
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | ||
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | |||
| Scissors | Sterilized | |||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | |||
| Syringe | 10 – 20 mL | |||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | |||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery | |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | |||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
References
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
