Isolamento da Human Umbilical células musculares arteriais (HUASMC)
Summary
Os cordões umbilicais são usados para isolar as células do músculo liso por caminhos diferentes. Neste trabalho utilizou-se o tratamento enzimático de células musculares lisas isoladas.
Abstract
O cordão umbilical humano (UC) é uma amostra biológica que pode ser facilmente obtida logo após o nascimento. Esta amostra biológica é, na maioria das vezes, descartada e sua coleção não implica qualquer risco acrescido para a saúde dos recém-nascidos ou a mãe s. Além disso há as questões éticas são levantadas. A UC é composta por uma veia e duas artérias do qual ambas as células endoteliais (CE)<sup> 1</sup> E células musculares lisas (PMEs)<sup> 2</sup>, Dois dos principais componentes celulares dos vasos sanguíneos, podem ser isoladas. Neste projeto o SMCs foram obtidos após o tratamento enzimático das artérias UC acordo com o procedimento experimental previamente descrito por Jaffe<em> Et al</em<sup> 3</sup>. Após o isolamento de células que foram mantidos em t-flash com DMEM-F12 suplementado com 5% de soro fetal bovino e foram cultivadas por várias passagens. Células mantiveram sua morfologia e outras características fenotípicas nas gerações diferentes. O objetivo deste estudo foi isolar células musculares lisas, a fim de usá-los como modelos para ensaios futuros com drogas constrictor, isolar e caracterizar estruturalmente os canais de cálcio tipo L, para estudar os aspectos celulares e moleculares da função vascular<sup> 4</sup> E para usá-los em engenharia de tecidos.
Protocol
Discussion
O SMC pode ser usado como modelo para testes futuros com drogas constrictor, para isolar e caracterizar estruturalmente os canais de cálcio tipo L, para estudar os aspectos celulares e moleculares da função vascular e usá-los em engenharia de tecidos. SMCs e ECs são fundamentais para o desenvolvimento de novos biomateriais que podem ser usados na produção de semi vasos sanguíneos sintético para ser usado em humanos.
Acknowledgements
Hospital Amato Lusitano, Castelo Branco Portugal.
Hospital Sousa Martins, Guarda Portugal.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | ||
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom-AG | 0117T | ||
| RPMI 1640 | Gibco | 3103806 | ||
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | ||
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | |||
| Scissors | Sterilized | |||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | |||
| Syringe | 10 – 20 mL | |||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | |||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery | |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | |||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
References
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
