Os cordões umbilicais são usados para isolar as células do músculo liso por caminhos diferentes. Neste trabalho utilizou-se o tratamento enzimático de células musculares lisas isoladas.
Abstract
O cordão umbilical humano (UC) é uma amostra biológica que pode ser facilmente obtida logo após o nascimento. Esta amostra biológica é, na maioria das vezes, descartada e sua coleção não implica qualquer risco acrescido para a saúde dos recém-nascidos ou a mãe s. Além disso há as questões éticas são levantadas. A UC é composta por uma veia e duas artérias do qual ambas as células endoteliais (CE)<sup> 1</sup> E células musculares lisas (PMEs)<sup> 2</sup>, Dois dos principais componentes celulares dos vasos sanguíneos, podem ser isoladas. Neste projeto o SMCs foram obtidos após o tratamento enzimático das artérias UC acordo com o procedimento experimental previamente descrito por Jaffe<em> Et al</em<sup> 3</sup>. Após o isolamento de células que foram mantidos em t-flash com DMEM-F12 suplementado com 5% de soro fetal bovino e foram cultivadas por várias passagens. Células mantiveram sua morfologia e outras características fenotípicas nas gerações diferentes. O objetivo deste estudo foi isolar células musculares lisas, a fim de usá-los como modelos para ensaios futuros com drogas constrictor, isolar e caracterizar estruturalmente os canais de cálcio tipo L, para estudar os aspectos celulares e moleculares da função vascular<sup> 4</sup> E para usá-los em engenharia de tecidos.
Protocol
Artérias são obtidos a partir de peças UC de 3-7 cm. Geleia de Wharton que envolve as artérias foi cuidadosamente removido, cortando-a com uma tesoura. Uma agulha sem corte-extremidade de um diâmetro externo de 0,6-1mm foi inserido cerca de 7 mm de uma extremidade das artérias dissecadas. Para remover o sangue restante no interior dos vasos, as artérias são verticalmente realizada e perfundidos com, aproximadamente 20 a 40 mL, solução salina fisiológica (PSS), usando uma seringa de 20 ml conecta…
Discussion
O SMC pode ser usado como modelo para testes futuros com drogas constrictor, para isolar e caracterizar estruturalmente os canais de cálcio tipo L, para estudar os aspectos celulares e moleculares da função vascular e usá-los em engenharia de tecidos. SMCs e ECs são fundamentais para o desenvolvimento de novos biomateriais que podem ser usados na produção de semi vasos sanguíneos sintético para ser usado em humanos.
Ribeiro, M. P., Relvas, R., Chiquita, S., Correia, I. J. Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC). J. Vis. Exp. (41), e1940, doi:10.3791/1940 (2010).