Isolatie van de Mens Umbilical arteriële gladde spiercellen (HUASMC)
Summary
De navelstrengen worden gebruikt om de gladde spiercellen isoleren door op verschillende manieren. In dit werk gebruikten we de enzymatische behandeling voor geïsoleerde gladde spiercellen.
Abstract
De menselijke navelstreng (UC) is een biologisch monster dat gemakkelijk kan worden verkregen net na de geboorte. Dit biologisch monster is, de meeste van de tijd, weggegooid en hun collectie impliceert geen extra risico's voor de pasgeborene of de moeder de gezondheid. Bovendien is er geen ethische bezwaren worden verhoogd. De UC is samengesteld door een ader en twee slagaders van waaruit zowel de endotheelcellen (EC)<sup> 1</sup> En gladde spiercellen (SMC)<sup> 2</sup>, Kunnen twee van de belangrijkste cellulaire componenten van de bloedvaten, worden geïsoleerd. In dit project wordt de SMC's werden verkregen na enzymatische behandeling van de UC slagaders dienovereenkomstig de experimentele procedure eerder beschreven door Jaffe<em> Et al.</em<sup> 3</sup>. Na celisolatie ze werden bewaard in T-Flash met DMEM-F12 aangevuld met 5% van het foetaal runderserum en werden gekweekt voor verschillende passages. Cellen behielden hun morfologische en andere fenotypische kenmerken in de verschillende generaties. Het doel van deze studie was om gladde spiercellen te isoleren, om ze te gebruiken als model voor toekomstige testen met constrictor drugs, isoleren en structureel te karakteriseren L-type calcium kanalen, de cellulaire en moleculaire aspecten van de vaatfunctie onderzoek<sup> 4</sup> En ze te gebruiken in tissue engineering.
Protocol
Discussion
De SMC kan gebruikt worden als model voor toekomstige testen met constrictor drugs, te isoleren en structureel te karakteriseren L-type calcium kanalen, de cellulaire en moleculaire aspecten van de vasculaire functie te bestuderen en ze te gebruiken in tissue engineering. SMC's en EC's zijn fundamenteel voor de ontwikkeling van nieuwe biomaterialen die gebruikt kunnen worden in de productie van semi-synthetische bloedvaten om te worden gebruikt bij de mens.
Acknowledgements
Ziekenhuis Amato Lusitano, Castelo Branco Portugal.
Ziekenhuis Sousa Martins, Guarda Portugal.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | Sigma-Aldrich | 095K8311 | ||
| Fetal bovine serum (FBS) | Biochrom-AG | 0117T | ||
| RPMI 1640 | Gibco | 3103806 | ||
| Collagen | Sigma-Aldrich | 067K2302 | ||
| Antibiotic | 10 μL/ 1 mL of medium | |||
| Scissors | Sterilized | |||
| Needle | Diameter of 0.6-1mm | |||
| Syringe | 10 – 20 mL | |||
| Physiological Saline Solution (PSS) | 20-40 mL per artery | |||
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | 047K1052 | 3 mL per artery | |
| Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) | Diluted collagenase | |||
| Phosphate buffered saline solution (PBS) | Warmed to 37°C |
References
- Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
- Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
- Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
- Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).
