In Vivo Eletroporação: Um método específico do local para transfetar zebrafish

Abstract

Fonte: Durovic, T., et al. Método de Eletroporação para Entrega In Vivo de DNA plasmídeo no Telencephalon de Zebrafish Adulto. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve a eletroporação in vivo, que é uma técnica para a entrega de DNA em células ependymoglial em zebrafish adulto.

Protocol

1. Eletroporação Remova o peixe da configuração da injeção enquanto ainda o segura na esponja. Mergulhe o lado interno da ponta dos eletrodos no gel de ultrassom. Cubra o telencephalon de peixe com uma pequena quantidade de gel de ultrassom. Posicione a cabeça do peixe entre os eletrodos, colocando o eletrodo positivo no lado ventral da cabeça do peixe e o eletrodo negativo no lado dorsal(Figura 1C),enquanto ainda segura o corpo do peixe na esponja. Isso de…

Representative Results

Figura 1: Representação esquemática da seção coronal do telencephalon de zebrafish. (A) Esquema de uma seção coronal de telencephalon de zebrafish, destacando a posição das células ependymoglial, que estão forrando a superfície ventricular e construindo a parede ventricular ventral. A camada ependímal dorsal está fazendo a ponte entre os dois hemisférios e cobrindo o ventrículo (V), locali…

Materials

Ultrasound gel	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes	Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus	45-0486	1mm diameter
Electroporation device	BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus	45-0662