Anopheles stephensi muggen zijn vectoren voor malaria wonen India en de rest van Azië. Deze video toont de techniek voor het uitvoeren van micro-injecties van deze soorten met transgenen die weerstand zal verlenen aan de malaria aan de mug. Een groot deel van de methodologie kunnen zien in deze video is van toepassing op micro-injectie technieken van andere muggensoorten.
Abstract
De introductie van exogene genen in het genoom van muggen nodig micro-injectie technieken afgestemd op de specifieke soorten van belang. Deze video toont een protocol methode die wordt gebruikt door de James laboratorium DNA-constructen microinject in Anopheles stephensi embryo's voor het genereren van getransformeerde muggen. Technieken voor het bereiden van micro-injectie naalden, het verzamelen en het voorbereiden van embryo's en het uitvoeren van de micro-injectie worden geïllustreerd.
Protocol
Voorbereiding van de micro-injectie: Bloed te voeden muggen: voor injectie van maandag tot en met woensdag voeden vrouwen op de vorige vrijdag. Tot en met donderdag en vrijdag, voeden vrouwen injecteren op maandag van dezelfde week. Bereid de Quartz naalden met behulp van programma 2 en isotone buffer (zie ook Materiaal). "Het leggen tube" voor de embryo's is de reguliere Drosophila cultuur flacon. Natte watten in de bodem, met een natte schijf van fil…
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Injection Quartz needles
Sutter Instrument
O.D.- 1.0 mm, I.D.-0.70, 10 cm length, are prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 mm micropipette puller.
Terenius, O., Juhn, J., James, A. A. Injection of An. stephensi Embryos to Generate Malaria-resistant Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e216, doi:10.3791/216 (2007).