공동 문화 모델 녹농균 Biofilms는 라이브 인간 에어웨이 세포에 들어라
Summary
본 논문은 성장의 다른 방법을 설명합니다<em> 녹농균</em> 교양 인간기도 상피 세포에서 biofilms. 이러한 프로토콜은 biofilm 단위 (CFU)를 형성 식민지를 측정, biofilm의 얼룩 및 biofilm의 세포 독성을 공부, biofilm의 시각화를 포함한 biofilm 형성의 다양한 측면을 연구 적용할 수 있습니다.
Abstract
세균성 biofilms는 다양한 인간 질병의 숫자와 관련되어 있지만, biofilm 개발은 일반적으로 비 – 생활 표면에 연구되었습니다. 본 논문에서는, 우리는 문화의 성장 인간기도 상피 세포 (CFBE 세포)에 형성 녹농균의 biofilms에 대한 프로토콜을 설명합니다. 첫 번째 방법에서는 (정적 공동 문화 Biofilm 모델을 칭했다), P. 녹농균이라는 박테리아가 표준 조직 문화 접시에 합류 monolayers로 성장 CFBE 전지 incubated입니다. 박테리아가 상피 세포에 매우 독성이지만, 아르기닌 지연 monolayer의 파괴 또한 충분히 biofilms에 대한 CFBE 세포에서 만들어집니다. 두 번째 방법은 (흐름 전지 공동 문화 Biofilm 모델을 칭했다), 종종 CFBE 세포의 합류 monolayer를 지원하는 유리 coverslip을 수용하기 위해 biofilm 연구에 사용되는 biofilm 흐름 전지 장치의 적응을 포함한다. 이 monolayer는 P.과 주사입니다 녹농균이라는 박테리아와 연동 펌프 다음 세포에 걸쳐 신선한 매체를 흐르고 있습니다. 두 시스템에서 세균성 biofilms는 접종 후 6-8시간 이내에 양식. biofilm의 시각화는 P.의 사용에 의해 향상됩니다 녹농균이라는 박테리아의 변종은 녹색 형광 단백질 constitutively (GFP)을 표현. 정적 및 흐름 세포 공동 문화 Biofilm의 assays 일찍 P.을위한 모델 시스템 아르 낭성 섬유증 (CF) 폐, 이러한 기술의 녹농균이라는 박테리아 감염은 P.의 다양한 측면을 허용 녹농균이라는 박테리아의 biofilm 형성과 독성이 biofilm의 세포 독성, biofilm CFU 측정 및 biofilm을 얼룩과 시각화를 포함하여 공부 할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
Biofilms 환경 자극에 대한 응답으로 양식 박테리아의 커뮤니티입니다. 이러한 환경 신호 표면, 집합, exopolysaccharides 생산, 그리고 증가 항생 저항 10 다른 phenotypes에 바인딩에서 발생하는 각 세균 내에 세계적인 규제 변화로 이어집니다. 수십년 지난 몇 동안 많은 증거가 biofilms는 만성 감염의 pathogenesis에 큰 역할을한다는 가설을 지원하고 있습니다. 예를 들어, 그것은 잘 접수되었는지 P. ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는이 모델을 개발 지침과 제안을 G. O 툴 감사하고 싶습니다. 이 작품은 낭성 섬유증 재단 (GGA, STANTO07RO 및 BAS에 STANTO08GA에 ANDERS06F0), 국립 보건원 (GGA 및 BAS에 R01 – HL074175에 T32A107363)에서 지원하고,되었다 바이오 메디컬 연구 우수 연구 자원 센터를위한 국립 센터 (꼬브르 BAS에 P20 – RR018787).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| FCS2 (Focht Live-Cell) chamber | Bioptechs, Butler, PA | 060319131616 | ||
| FCS2 chamber controller | Bioptechs, Butler, PA | 060319-2-0303 | ||
| 40 mm glass coverslips | Bioptechs, Butler, PA | PH 40-1313-0319 | ||
| MEM | Mediatech, Manassass, VA | #10-010-CV | ||
| MEM without phenol red | Mediatech, Manassass, VA | Mediatech, Manassass, VA |
References
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