Summary

Micro-injectie van A. aegypti embryo's om transgene muggen verkrijgen

Published: July 04, 2007
doi:

Summary

In deze video, Nijole Jasinskiene toont de methoden die gebruikt worden om transgene Aedes aegypti muggen, die vectoren voor knokkelkoorts te genereren. De technieken voor het correct opstellen van micro-injectie naalden, droogmiddelen embryo's en het uitvoeren van micro-injectie worden aangetoond.

Abstract

In deze video, Nijole Jasinskiene toont de methoden die gebruikt worden om transgene Aedes aegypti muggen, die vectoren voor knokkelkoorts te genereren. De technieken voor het correct opstellen van micro-injectie naalden, droogmiddelen embryo's en het uitvoeren van micro-injectie worden aangetoond.

Protocol

Voorbereiding van de micro-injectie Bloed te voeden muggen: voor injectie van maandag tot vrijdag voeden vrouwen op de vorige donderdag. Bereid glas naalden met behulp van het programma 3 of 2 (zie ook Materiaal). Leggen buis voor de embryo's is Drosophila cultuur flacon. Natte watten in de bodem, met een natte schijf van filtreerpapier te bedekken. Bereid plastic dekglas door steken dubbelzijdig tape om het ene uiteinde. Trim tape om dekglas, zodat het eindigt aan de rand va…

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
1x Injection solution Buffer     5mM KCl, 0.1mM sodium phosphate, ph 6. 8
Construct plasmid DNA     0.5 mg/ml.
Helper plasmid DNA     0.3 mg/ml
EndoFree Plasmid kit Kit Qiagen    
Millex-GV column     SLGV RO4 NL To clean DNA.
Glass puller Instrument Sutter Instrument Co Model P-87 Heat-815, Pull-10, Vel-10, Time-100. Heat-700, Pull-30, Vel-36, Time-50
Quartz puller Instrument Sutter Instrument Co Model P-2000 Heat-275, Fil-3, Vel-38, Del-250, Pull-141
Injection glass needles       Prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 um micropipette puller. When the needle is new, the tip is sealed and usually breaks in the first or second injection or the glass needle tip can be beveled using a Brown type micro-pipette beveller (Sutter Instrument).
Aedes aegypti Animal     Male and female mosquitos, to obtain embryos.
Drosophila culture vial       For mosquito egg-laying.
Halocarbon oil Reagent     Oil for desiccation: Halocarbon oil 700:Halocarbon oil 27(1:1)
Forceps No5 Tool      
Fine paintbrush   Sable No. 0000  
Whatman paper Tool      
Microloader Tool Eppendorf 5242 956.003  
Transjector Tool Eppendorf    
Microscope   Leica   With moving stage and micromanipulator.
3MM Whatman paper        
double sided tape        
check_url/fr/219?article_type=t

Play Video

Citer Cet Article
Jasinskiene, N., Juhn, J., James, A. A. Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e219, doi:10.3791/219 (2007).

View Video