Высокомолекулярных торговли между растительных клеток можно оценить с помощью выражения временно флуоресцентно с метками белок и анализ его внутри-и межклеточных распределение по конфокальной микроскопии.
Abstract
Здесь мы приведем простой и быстрый протокол для обнаружения и оценки степени клетка-клетка макромолекулярного транспорта в подошвы. В этом протоколе флуоресцентно меченых белков интереса временно выражается в растительной ткани следующие biolistic доставки его ДНК, кодирующей конструкции. Внутри-и межклеточных распределения меченых белков затем анализируется с помощью конфокальной микроскопии. Мы описываем эту технологию в деталях, предоставление шаг за шагом, протоколы анализа и оценки степени symplastic транспортного белка в трех видов растений Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana и Н. Tabacum (табак).
Protocol
Фон Symplastic транспорта макромолекул через завода межклеточных соединений, плазмодесмы, представляет интерес для многих фитопатологов и биологов. Например, некоторые вирусные белки, как известно, регулирует plasmodesmal пределы исключения размера, чтобы вирусные движения 1-3….
Discussion
Ключ для успеха symplastic анализа транспорт для получения высокой эффективности преобразования, что позволяет выпускать статистически значимое и легко поддающийся обнаружению кластеров сигнала. Это может быть достигнуто с помощью листьев собранных от здоровых, надежных растений, а такж…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Наша работа поддержана грантами NIH / NIGMS, NSF, USDA / НИФА и BARD к ВК.
Ueki, S., Meyers, B. L., Yasmin, F., Citovsky, V. A Cell-to-cell Macromolecular Transport Assay in Planta Utilizing Biolistic Bombardment. J. Vis. Exp. (42), e2208, doi:10.3791/2208 (2010).