Una célula a célula macromoleculares de transporte de ensayo En la Planta La utilización de bombardeo biolística
Summary
El tráfico de macromoléculas entre las células vegetales se pueden evaluar de forma transitoria que expresa una proteína fluorescente con etiquetas de interés y el análisis de su distribución intra e intercelulares mediante microscopia confocal.
Abstract
A continuación, presentamos un protocolo sencillo y rápido para detectar y evaluar la magnitud de la célula a célula de transporte macromolecular en la planta. En este protocolo, marcado con fluorescencia de proteínas de interés se expresa de forma transitoria en el tejido vegetal después de la entrega biolística de su ADN que codifica para la construcción. La distribución intra e intercelulares de la proteína marcada se analiza por microscopía confocal. Se describe en detalle esta tecnología, ofreciendo paso a paso a protocolos de ensayo y evaluar la magnitud del transporte de proteínas simplástica en tres especies de plantas, Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana y N. tabacum (tabaco).
Protocol
Discussion
La clave para el éxito del ensayo de transporte simplástica es la obtención de la eficiencia de transformación de alto, que permite la producción de racimos de señal estadísticamente significativa y detectable fácilmente. Esto puede lograrse utilizando las hojas cosechadas de plantas sanas, robustas, y la preparación de partículas de oro recubiertas por una preparación de ADN puro y concentrado.
Utilizando las hojas en la misma etapa de crecimiento también es vital para la fiabil…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nuestro trabajo es apoyado por becas de NIH / NIGMS, NSF, USDA / Nifa, y BARD a VC.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Gold microparticles, 1.0 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2262 | ||
| Gold microparticles, 0.6 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2263 | ||
| Spermidine | Sigma | S0266-1G | ||
| Tefzel tubing | Bio-Rad | 165-2441 | ||
| Helios cartridge preparatory station | Bio-Rad | 165-2420 | ||
| Tubing cutter | Bio-Rad | 165-2422 | ||
| Helios gene gun | Bio-Rad | 165-2432 | ||
| Helium gas regulator | Bio-Rad | 165-2413 |
References
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