Summary

胸腺淋巴瘤的T细胞系的推导 ATM - / -</sup P53 - / -</sup鼠标

Published: April 03, 2011
doi:

Summary

在这个视频中,我们展示了一个协议来建立小鼠胸腺淋巴瘤细胞株。通过这个协议,我们已经成功地建立了几个从ATM / T细胞线 – 和p53 – / – 小鼠胸腺淋巴瘤。

Abstract

建立的细胞系是一个重要的的研究工具,它可以减少使用实验动物的研究。某些菌株的转基因小鼠, ATM – / – p53 – / –胸腺淋巴瘤不断发展早在生活中1,2,因此,可以作为一个可靠的来源小鼠T细胞株的推导。在这里,我们建立了小鼠胸腺淋巴瘤的T细胞系的发展,而不需要添加白细胞素1,3以前的协议来描述一个详细的协议。从年龄在3至6个月的小鼠肿瘤收获,最早表现的基础上,弯腰驼背的姿势观察可见肿瘤,呼吸困难,穷人疏导并在敏感品系1,4浪费。我们已经成功地建立了几个使用此协议的T细胞系和近交的自动取款机- / – [FVB/N- 自动柜员机tm1Led / J] 2 和p53 – / – [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 5只。我们进一步表明,既定的T细胞的人口超过90%表示CD3,CD4和CD8。与稳定建立的细胞株,使用本议定书所产生的T细胞已传了一年多。

Protocol

1。肿瘤剖析肿瘤清扫干净的纸巾或一次性手术悬垂放在解剖台上,喷以70%的乙醇。 本议定书小鼠常规安乐死的CO 2。安乐死鼠标放置在解剖台上,和动物两侧喷用乙醇。鼠标是在地方上的夹层板,使用四个或更多的推引脚通过插入腿和喷用70%乙醇彻底。 从耻骨头的基地使用无菌剪刀,同时也避免了潜在的肌肉和渗透到体腔,在中线的皮肤被切断。 打开腹腔…

Discussion

在这个协议中,我们提供了详细的程序,建立从两个不同的鼠标基因型的小鼠的T 细胞系;自动取款机- / [FVB/N- ATM tm1Led / A]和p53 – / [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J]。 。通过使用这个协议中,共有6(满分7次尝试自动取款机– / -三(5次尝试)P53 – / -小鼠的T细胞系已经建立在我们的实验室。 / – -…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

作者衷心感谢鲍里斯Reizis在哥伦比亚大学的微生物学和免疫学系博士的有益讨论。我们也希望在康奈尔大学兽医学院,感谢冯富珍博士Bynoe,罗德曼Getchell博士和Deequa Mahamed从微生物学和免疫学系与流式细胞仪和视频编辑的协助下,黄路为技术援助。作者还希望感谢魏斯实验室杜哈明和魏斯实验室的成员,他们的手稿和视频制作,严格审查和斯蒂芬妮Yazinski育种和基因分型p53基因- / -小鼠。在康奈尔大学机构动物护理和使用委员会规定的准则和法规的规定进行动物实验。这项研究是由美国农业部部,合作国家研究,教育和推广服务,动物健康和疾病研究计划(GED和RSW)和美国国立卫生研究院拨款R03 HD058220和R01CA108773(RSW)提供的资金支持部分。视频制作杜哈明魏斯实验室的人员使用的内部设施。

Materials

  • Ice bucket
  • 70% ethanol
  • Dissection pad consisting of foam block covered with aluminum foil and pins
  • Two sets of small sterile scissors and forceps
  • Sterile 150 mm2 Petri dish (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA; cat. #08-757-13)
  • Sterile 18 gauge needles
  • 50 mL conical tubes (Corning Inc., Corning NY; cat # 430829)
  • 10% buffered formalin
  • Tissue culture flasks
    • T-25 (TPP, Trasadingen, Switzerland; cat # 90025)
    • T-75 (TPP, Trasadingen, Switzerland; cat # 90075)
  • 6-well plates (Corning Inc., Corning NY; cat # 3506)
  • Sterile phosphate buffered saline pH 7.2 (PBS)
  • Culture medium
    • RPMI 1640 with 25 mM HEPES, 200 mM L-glutamine (Lonza, Walkersville, MD; cat#12-115F) supplemented with the following:
      • 10% heat inactivated (56°C, 30 min) fetal bovine serum (FBS; Hyclone, Logan, UT; cat# SH30088.03)
      • 1% penicillin and streptomycin (Mediatech, Manassas,VA; cat# 30-002-CI)
      • 1% nonessential amino acids (Mediatech; cat#25-025-CI)
      • 55 mM 2β-mercaptoethanol (Sigma, St Louis, MO; cat#M752)
  • Dimethyl sulfoxide (DMSO; Calbiochem, La Jolla, CA; cat # 317275)
  • Antibodies (eBioScience, San Diego, CA)
    • anti-CD3-FITC (cat. #11-0031-85)
    • anti-CD4-APC (cat. #17-0041-83)
    • anti-CD8-PE (cat.#12-081-85)
  • Bovine serum albumin (BSA; Life Technologies, Grand Island, NY; cat #. 11018-017)
  • Concanavalin A (Sigma cat# C5275)
  • 1.8 mL freezing vials (Nunc, Roskilde, Denmark; cat# 368632)

References

  1. Barlow, C. Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia. Cell. 86, 159-171 (1996).
  2. Elson, A. Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).
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  8. Maser, R. S. Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers. Nature. 447, 966-971 (2007).

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Citer Cet Article
Jinadasa, R., Balmus, G., Gerwitz, L., Roden, J., Weiss, R., Duhamel, G. Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice. J. Vis. Exp. (50), e2598, doi:10.3791/2598 (2011).

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