Matrigel מבוסס גיבוש Tube Assay להעריך את פעילות Vasculogenic של תאים סרטניים
Summary
Assay הקמת הצינור משמש להערכת פעילות כלי הדם של תאים סרטניים.
Abstract
במהלך העשורים האחרונים, assay היווצרות צינור באמצעות גורם הגדילה מופחת Matrigel כבר מועסקים בדרך כלל כדי להדגים את פעילות angiogenic לתאי אנדותל של כלי דם במבחנה 1-5. עם זאת, הראיות לאחרונה גדל הראה כי זה assay אינו מוגבל לבחון את התנהגותו של כלי הדם ותאי האנדותל. במקום זאת, הוא גם נעשה שימוש כדי לבחון את היכולת של מספר תאים סרטניים לפתח פנוטיפ וסקולרית 6-8. יכולת זו עולה בקנה אחד עם התנהגות vasculogenic שלהם מזוהה בחיות xenotransplanted, תהליך המכונה vasculogenic חיקוי (VM) 9. יש שפע של ראיות להוכיח כי VM גידול התא בתיווך ממלא תפקיד חיוני בהתפתחות הגידול, עצמאית של אנגיוגנזה תא האנדותל 6, 10-13. לדוגמה, תאים סרטניים נמצאו להשתתף היווצרות perfused דם, כלי דם בתוך ערוץ דגימות רקמה של חולים מלנומה גליובלסטומה 8, 10, 11. כאן, אנו תיאר assay רשת צינורי ככלי שימושי להערכת הפעילות vasculogenic של תאים סרטניים. מצאנו כי כמה שורות תאים סרטניים כגון מלנומה B16F1 תאים, גליובלסטומה U87 תאים סרטן השד מד"א-MB-435 תאים מסוגלים טופס tubules כלי הדם, אך יש כאלה שלא כמו סרטן המעי הגס HCT116 תאים. יתר על כן, זה פנוטיפ כלי הדם תלויה מספרים התא מצופה על Matrigel. לכן, assay זה עשוי לשמש כלי רב עוצמה למסך את הפוטנציאל של כלי הדם של מגוון רחב של סוגי תאים כולל תאים של כלי הדם, תאים סרטניים, כמו גם תאים אחרים.
Protocol
Discussion
על מנת assay הזה להצליח, איכות Matrigel יש לבדוק תחילה. מדגם קטן ניתן לקבל BD Bioscience מראש בטווח assay באמצעות HMVECs. מוצרים אצווה שונים עשויים להציג איכויות שונה שבו הרבה מסוימים אינם מספקים מצב אופטימלי להקמת הצינור. שנית, כל הבועות יש להימנע כאשר aliquot של Matrigel נטען צלחות 96 ובכן, מפנ…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי NCI R01 CA120659 (RS).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 11995 |
| FBS | Invitrogen | 16000-044 |
| Growth factor-reduced Matrigel | BD Bioscience | 47743-720 |
| EBM2 kit | Lonza | CC-3156 |
| Nikon ECLIPSE TS100 microscope | Nikon |
References
- Shao, R., Guo, X. Human microvascular endothelial cells immortalized with human telomerase catalytic protein: a model for the study of in vitro angiogenesis. Biochemical & Biophysical Research Communications. 321, 788-794 (2004).
- Ribeiro, M. J. Hemostatic properties of the SV-40 transfected human microvascular endothelial cell line (HMEC-1). A representative in vitro model for microvascular endothelium. Thromb Res. 79, 153-1561 (1995).
- Ades, E. W. HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line. J Invest Dermatol. 99, 683-690 (1992).
- Shao, R. Acquired expression of periostin by human breast cancers promotes tumor angiogenesis through up-regulation of vascular endothelial growth factor receptor 2 expression. Molecular & Cellular Biology. 24, 3992-4003 (2004).
- Shao, R. YKL-40, a secreted glycoprotein, promotes tumor angiogenesis. Oncogene. 28, 4456-4468 (2009).
- Basu, G. D. A novel role for cyclooxygenase-2 in regulating vascular channel formation by human breast cancer cells. Breast Cancer Research. 8, R69-R69 (2006).
- Scavelli, C. Vasculogenic mimicry by bone marrow macrophages in patients with multiple myeloma. Oncogene. 27, 663-674 (2008).
- El Hallani, S. A new alternative mechanism in glioblastoma vascularization: tubular vasculogenic mimicry. Brain. 133, 973-982 (2010).
- Maniotis, A. J. Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry. American Journal of Pathology. 155, 739-752 (1999).
- Hendrix, M. J., Seftor, E. A., Hess, A. R., Seftor, R. E. Vasculogenic mimicry and tumour-cell plasticity: lessons from melanoma. Nature Reviews Cancer. 3, 411-421 (2003).
- Folberg, R. Tumor cell plasticity in uveal melanoma: microenvironment directed dampening of the invasive and metastatic genotype and phenotype accompanies the generation of vasculogenic mimicry patterns. American Journal of Pathology. 169, 1376-1389 (2006).
- Liu, C. Prostate-specific membrane antigen directed selective thrombotic infarction of tumors. Recherche en cancérologie. 62, 5470-5475 (2002).
- Sood, A. K. The clinical significance of tumor cell-lined vasculature in ovarian carcinoma: implications for anti-vasculogenic therapy. Cancer Biology & Therapy. 1, 661-664 (2002).
- Shirakawa, K. Hemodynamics in vasculogenic mimicry and angiogenesis of inflammatory breast cancer xenograft. Recherche en cancérologie. 62, 560-566 (2002).
- Ruf, W. Differential role of tissue factor pathway inhibitors 1 and 2 in melanoma vasculogenic mimicry. Recherche en cancérologie. 63, 5381-5389 (2003).
- Seftor, R. E. Cooperative interactions of laminin 5 gamma2 chain, matrix metalloproteinase-2, and membrane type-1-matrix/metalloproteinase are required for mimicry of embryonic vasculogenesis by aggressive melanoma. Recherche en cancérologie. 61, 6322-6327 (2001).
- Shirakawa, K. Vasculogenic mimicry and pseudo-comedo formation in breast cancer. International Journal of Cancer. 99, 821-828 (2002).
