腫瘍細胞のVasculogenic活性を評価するためにマトリゲルベースのチューブ形成アッセイ
Summary
チューブ形成アッセイは、腫瘍細胞の血管活性を評価するために使用されます。
Abstract
過去数十年にわたって、チューブ形成アッセイを使用して成長因子を減らしたマトリゲルは通常、 体外 1-5 の血管内皮細胞の血管形成活性を実証するために採用されています。しかし、最近成長している証拠は、このアッセイは、内皮細胞の血管の動作をテストするために限定されないことが示されている。その代わりに、それはまた、血管の表現型6-8を開発するために腫瘍細胞の数の能力をテストするために使用されています。この機能により、異種移植動物、vasculogenic擬態（VM）9と呼ばれるプロセスで特定された彼らのvasculogenic行動と一致していた。その腫瘍細胞媒介性のVMを証明する証拠の多くがある内皮細胞の血管新生6、10-13の独立した腫瘍の発生に重要な役割を、果たしている。例えば、腫瘍細胞は、悪性黒色腫と神経膠芽腫患者の8、10、11から組織サンプルにおける血液灌流、血管チャネルの形成に関与することが見出された。ここで、我々は、腫瘍細胞のvasculogenic活性の評価に有用なツールとして、この筒状のネットワークのアッセイを説明した。我々はそのようなメラノーマB16F1細胞、神経膠芽腫U87細胞、および乳癌MDA – MB – 435細胞のようないくつかの腫瘍細胞株は、血管の細管を形成することができることを発見、しかし、一部には、結腸癌HCT116細胞などしないでください。さらに、この血管の表現型は、マトリゲル上に播種した細胞数に依存しています。したがって、このアッセイは、血管細胞、腫瘍細胞だけでなく、他の細胞を含む種々の細胞型の血管性をスクリーニングするための強力なユーティリティとして機能することができる。
Protocol
Discussion
成功するために、このアッセイのためには、マトリゲルの品質は、最初にテストする必要があります。小さなサンプルがHMVECsを使用してアッセイを事前に実行するためのバイオサイエンスBDから得ることができる。別のバッチの製品には、いくつかの多くは管腔形成のための最適な条件を提供しないような異なる資質を表示することがあります。マトリゲルのアリコートを96ウェルプレートに…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NCI R01 CA120659（RS）によってサポートされていました。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 11995 |
| FBS | Invitrogen | 16000-044 |
| Growth factor-reduced Matrigel | BD Bioscience | 47743-720 |
| EBM2 kit | Lonza | CC-3156 |
| Nikon ECLIPSE TS100 microscope | Nikon |
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