Windowing Chicken Eggs für Developmental Studies
Summary
Die leichte Zugänglichkeit des Embryos ist für Experimente erlaubt Zellanlagen verschiedene Möglichkeiten, einschließlich Küken Wachtel Chimären und Schwerpunkte Farbstoffmarkierung Karte. In diesem Artikel zeigen wir ein Ei Herstellungsmethode, die für längere Überlebenszeiten optimiert wurde.
Abstract
Das Studium der Entwicklung wurde stark durch die Verwendung des Hühnerembryo als experimentelles Modell unterstützt. Die leichte Zugänglichkeit des Embryos ist für Experimente erlaubt Zellanlagen verschiedene Möglichkeiten, einschließlich Küken Wachtel Chimären und Schwerpunkte Farbstoffmarkierung Karte. Darüber hinaus ermöglicht es der molekularen Störungen von mehreren Arten, darunter Vermittlung von Protein-beschichteten Beads und Einführung von Plasmid-DNA mit in ovo Elektroporation. Diese Experimente haben wichtige Daten über die Entwicklung des zentralen und peripheren Nervensystems ergab. Für viele dieser Studien ist es notwendig, die Eierschale öffnen und wieder ohne Störung des Embryos Wachstum. Der Embryo kann in aufeinanderfolgenden Entwicklungsstadien durch erneutes Öffnen der Eischale untersucht werden. Es gibt zwar mehrere ausgezeichnete Methoden für die Öffnung der Hühnereier, die in diesem Artikel werden wir zeigen, eine Methode, die für lange Überlebenszeiten optimiert wurde. Bei dieser Methode liegt das Ei auf seiner Seite und ein kleines Fenster in die Schale geschnitten. Nach dem experimentellen Verfahren wird die Shell benutzt, um das Ei für die Dauer ihrer Entwicklung zu decken. Klare Plastikband über der Eierschale schützt den Embryo und halten die Feuchtigkeit während der Rest der Inkubationszeit. Diese Methode wurde Anfang an zwei Tagen der Inkubation eingesetzt und ermöglichte das Überleben durch ausgereifte embryonalen Alters.
Protocol
Discussion
Diese Methode ermöglicht eine lange Überlebenszeit folgenden experimentellen Manipulationen. Zum Beispiel erlaubt Farbstoff-Kennzeichnung Studien Überleben E10 oder später in ein Schicksal, Mapping-Studie (1). Darüber hinaus hat es für in ovo Elektroporation Studien, die Veränderung der Genexpression und Entwicklung erforderlich, um zu späteren Entwicklungsstadien (2-6) weiter verfahren werden eingesetzt. Diese Fenstertechnik können in Kombination mit jedem Verfahren, das Überleben nach Manipulationen am Embryo braucht eingesetzt …
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rotating incubator | Profi | Maintain at 37° Degrees with relative humidity set above 60% | ||
| 70 % EtOH | ||||
| gauze | ||||
| 3M plastic tape | ||||
| 10cc syringe | 1/egg | |||
| 18G needles | 1½ inch needle, 1/syringe | |||
| Dissection scissors | 4″ sharp straight blades | |||
| Fertilized Eggs |
References
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- Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. . Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
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