機械的な力は、肺の開発と肺傷害において重要な役割を果たしています。ここでは、げっ歯類の胎児の肺II型上皮細胞と線維芽細胞を分離するとを使用して機械的刺激にそれらを公開する方法について説明します。<em> in vitroで</em>システム。
反復的な呼吸のような動きによって、流体の膨張によって子宮内で生成された機械的な力は、通常の肺の開発のために重要である。肺開発の主要なコンポーネントは、肺サーファクタントの主要な源、肺胞II型上皮細胞の分化である。これらの細胞はまた、肺胞腔、宿主防御、および損傷修復に体液の恒常性に参加しています。さらに、遠位の肺実質細胞が直接、出生後の機械的人工換気中の誇張されたストレッチを公開することができます。しかし、肺の細胞が肺の開発に影響を与えると肺傷害を促進するために機械的刺激を感知する正確な分子·細胞メカニズムは完全に理解されていません。ここでは、げっ歯類の胎児の肺からのII型細胞と線維芽細胞を単離するためのシンプルかつ高純度のメソッドを提供します。その後、我々は、機械的な力をシミュレートし、胎児の細胞に機械的な刺激を提供するためには、in vitroシステム、Flexcellひずみユニットで説明胎児肺の開発や肺損傷。この実験システムでは、ストレッチにさらされる胎児肺細胞では分子·細胞メカニズムを調べるための優れたツールを提供しています。このアプローチを使用して、私たちの研究室では、胎児の肺の開発と肺傷害にメカノに参加し、いくつかの受容体とシグナル伝達タンパク質を同定しました。
本稿では、我々は胎児のII型上皮細胞と線維芽細胞を分離し、Flexcellひずみ装置を使用して機械的な刺激にそれらを公開する方法について説明します。我々は、上皮細胞の分化1,2を評価し、受容体とストレッチ3月9日によって活性化シグナル伝達経路を研究するためにこのテクニックを使用しています。さらに、このメソッドはまた、機械的損傷10,11によって誘導され?…
The authors have nothing to disclose.
NIHの助成金HD052670でサポートされています。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | Sigma | D5648 | |
HEPES | Sigma | H3375 | |
Collagenase 1 | Sigma | C0130 | |
Collagenase 1A | Sigma | C9891 | |
Chicken serum | Sigma | C5405 | |
Screen cups | Sigma | CD1-1KT | |
Syringe filters | Fisher Scientific | 09-754-25 | |
100 micron nylon mesh | Small Parts, INC | CMN-100-D | |
30 micron mesh | Small Parts, INC | CMN-30-D | |
15 micron mesh | Dynamic Aqua-Supply Ltd. | NTX15 | |
Laminin | Sigma | L2020 | |
Collagen-1 | Collagen Biomed | PC0701 | |
Fibronectin | Sigma | F1141 | |
Vitronectin | Sigma | V-0132 | |
Elastin | Sigma | E-6402 | |
Bioflex plate | Flexcell International | BF-3001U | Uncoated |
Flexcell Strain Unit | Flexcell International | FX-5000 |