Mechanische krachten spelen een belangrijke rol in de longen de ontwikkeling en longschade. Hier wordt beschrijven een werkwijze voor knaagdier foetale long type II epitheelcellen en fibroblasten te isoleren en blootstellen aan mechanische stimulatie met een<em> In vitro</em> Systeem.
Mechanische krachten die ontstaan in de baarmoeder door repetitieve ademhaling-achtige bewegingen en door vocht opgezette buik zijn van cruciaal belang voor een normale long ontwikkeling. Een belangrijk onderdeel van de long ontwikkeling is de differentiatie van de alveolaire type II epitheelcellen, de belangrijkste bron van pulmonale surfactant. Deze cellen nemen ook deel aan vocht homeostase in het alveolaire lumen, afweer, en letsel reparatie. Bovendien kan distale longparenchym cellen direct worden blootgesteld aan overdreven rek bij mechanische ventilatie na de geboorte. Echter, de precieze moleculaire en cellulaire mechanismen die longcellen voelen mechanische stimuli om long-ontwikkeling te beïnvloeden en longschade te bevorderen niet helemaal duidelijk. Hier bieden wij een eenvoudige en hoge zuiverheid methode om type II cellen en fibroblasten van knaagdieren foetale longen te isoleren. Vervolgens beschrijven we een in vitro systeem De Flexcell Strain eenheid mechanische stimulatie voor foetale cellen simuleren mechanische krachten infoetale long ontwikkeling of longschade. Deze experimentele systeem biedt een uitstekend hulpmiddel om de moleculaire en cellulaire mechanismen te onderzoeken in foetale long cellen blootgesteld aan te rekken. Met behulp van deze benadering, heeft ons laboratorium geïdentificeerd verschillende receptoren en signalering eiwitten die in mechanotransductie deel te nemen aan foetale long ontwikkeling en longschade.
In dit manuscript beschrijven we een methode om foetale type II epitheelcellen en fibroblasten te isoleren en om ze bloot te stellen aan mechanische stimulatie met behulp van de Flexcell Strain Apparatus. We hebben gebruik gemaakt van deze techniek om differentiatie van epitheelcellen 1,2 beoordelen en receptor en signaalwegen geactiveerd door stretch 3-9 te bestuderen. Bovendien kan deze methode worden gebruikt om cel responsen veroorzaakt door mechanische schade 10,11 onderzoeken. De p…
The authors have nothing to disclose.
Ondersteund door NIH-subsidie HD052670.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | Sigma | D5648 | |
HEPES | Sigma | H3375 | |
Collagenase 1 | Sigma | C0130 | |
Collagenase 1A | Sigma | C9891 | |
Chicken serum | Sigma | C5405 | |
Screen cups | Sigma | CD1-1KT | |
Syringe filters | Fisher Scientific | 09-754-25 | |
100 micron nylon mesh | Small Parts, INC | CMN-100-D | |
30 micron mesh | Small Parts, INC | CMN-30-D | |
15 micron mesh | Dynamic Aqua-Supply Ltd. | NTX15 | |
Laminin | Sigma | L2020 | |
Collagen-1 | Collagen Biomed | PC0701 | |
Fibronectin | Sigma | F1141 | |
Vitronectin | Sigma | V-0132 | |
Elastin | Sigma | E-6402 | |
Bioflex plate | Flexcell International | BF-3001U | Uncoated |
Flexcell Strain Unit | Flexcell International | FX-5000 |