Un système expérimental pour étudier mécanotransduction dans les cellules des poumons du foetus
Summary
Les forces mécaniques jouent un rôle clé dans le développement du poumon et des lésions pulmonaires. Ici, nous décrivons une méthode pour isoler les rongeurs fœtales du poumon cellules de type II épithéliales et les fibroblastes et de les exposer à une stimulation mécanique en utilisant un<em> In vitro</em> Système.
Abstract
Les forces mécaniques générées in utero par répétitives de respiration-comme des mouvements et par la distension de fluide sont essentiels pour le développement normal des poumons. Un élément clé du développement du poumon est la différenciation des cellules alvéolaires de type II épithéliales, la principale source de surfactant pulmonaire. Ces cellules participent également à l'homéostasie du fluide dans les alvéoles du lumen, défense de l'hôte, et la réparation des blessures. En outre, distales du poumon cellules du parenchyme peut être directement exposés à l'étirement exagéré pendant la ventilation mécanique après la naissance. Cependant, les mécanismes moléculaires précis et cellulaires par lesquels les cellules pulmonaires détectent des stimuli mécaniques pour influencer le développement des poumons et de promouvoir des lésions pulmonaires ne sont pas complètement compris. Ici, nous donnons une méthode simple et la pureté élevée pour isoler des cellules de type II et les fibroblastes de poumons des rongeurs fœtaux. Puis, nous décrivons un système in vitro, L'Unité de la souche Flexcell, pour fournir une stimulation mécanique des cellules foetales, simulant des forces mécaniques dansle développement des poumons du foetus ou des lésions pulmonaires. Ce système expérimental fournit un excellent outil pour étudier les mécanismes moléculaires et cellulaires dans les cellules pulmonaires fœtales exposées à étirer. En utilisant cette approche, notre laboratoire a identifié plusieurs récepteurs et des protéines de signalisation qui participent à la mécanotransduction dans le développement des poumons du foetus et les lésions pulmonaires.
Protocol
Discussion
Dans ce manuscrit, nous décrivons une méthode pour isoler les cellules de type II fœtales épithéliales et les fibroblastes et de les exposer à une stimulation mécanique en utilisant l'appareil souche Flexcell. Nous avons utilisé cette technique pour évaluer la différenciation des cellules épithéliales 1,2 et d'étudier les voies de signalisation du récepteur et activés par l'étirement 3-9. En outre, cette méthode peut également être utilisée pour étudier les réponse…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Soutenu par NIH HD052670.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| DMEM | Sigma | D5648 | |
| HEPES | Sigma | H3375 | |
| Collagenase 1 | Sigma | C0130 | |
| Collagenase 1A | Sigma | C9891 | |
| Chicken serum | Sigma | C5405 | |
| Screen cups | Sigma | CD1-1KT | |
| Syringe filters | Fisher Scientific | 09-754-25 | |
| 100 micron nylon mesh | Small Parts, INC | CMN-100-D | |
| 30 micron mesh | Small Parts, INC | CMN-30-D | |
| 15 micron mesh | Dynamic Aqua-Supply Ltd. | NTX15 | |
| Laminin | Sigma | L2020 | |
| Collagen-1 | Collagen Biomed | PC0701 | |
| Fibronectin | Sigma | F1141 | |
| Vitronectin | Sigma | V-0132 | |
| Elastin | Sigma | E-6402 | |
| Bioflex plate | Flexcell International | BF-3001U | Uncoated |
| Flexcell Strain Unit | Flexcell International | FX-5000 |
References
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