Blodprøvetagningssystem for Biokemisk Analyse i Voksen Zebrafisk

Summary

Dette dokument viser en teknik til opsamling af blod fra den dorsale aorta af zebrafiskesperm. Det giver også instruktioner til opnåelse af serum til anvendelse i biokemiske analyser, såsom tests til bestemmelse af cholesterol-og triglyceridniveauer.

Abstract

Zebrafisken er blevet anvendt som en dyremodel til undersøgelse af adskillige humane sygdomme. Det kan tjene som en vigtig præklinisk platform for studier af molekylære begivenheder og terapeutiske strategier samt til evaluering af fysiologiske mekanismer nogle patologier ^1.

Der er relativt få publikationer i forbindelse med voksne zebrafisk fysiologi af organer og systemer ^2, hvilket kan føre forskerne til at udlede, at de grundlæggende teknikker er nødvendige for at tillade udforskning af zebrafisk systemer mangler ^3. Hæmatologiske biokemiske værdier af zebrafisk blev først rapporteret i 2003 af Murtha og kolleger ^4, der ansat en blodtapning teknik, første gang beskrevet af Jagadeeswaran og hans kolleger i 1999. Kort fortalt blev blod opsamlet via en mikropipettespids gennem en tværgående incision, ca 0,3 cm i længde i området af den dorsale aorta ^5. På grund af de små involverede dimensioner, detteer en høj-præcisions teknik, der kræver en højt kvalificeret læge. Den samme teknik blev brugt af den samme gruppe i en anden publikation i samme år ^6. I 2010 vurderede Eames og kolleger hele blodsukkerniveauet i zebrafisk ^7. De fik adgang til blodet ved at udføre decapitations med en saks og derefter indsætte en hepariniseret mikrokapillær samling rør i brystfinner artikulation. De nævner problemer med hæmolyse, der blev løst med en passende opbevaringstemperatur baseret på arbejdet Kilpatrick et al. ^8. Når man forsøger at anvende Jagadeeswaran Teknikken i vores laboratorium har vi fundet, at det var vanskeligt at snittet i nøjagtigt det rette sted, som ikke at tillade en væsentlig mængde blod tabt før opsamling kunne påbegyndes.

For nylig Gupta et al. ⁹ beskrevet, hvordan at dissekere voksne zebrafisk organer Kinkle et al. ¹⁰ beskrevet hvordan man udfører intraperitonEAL injektioner og Pugach et al. ^11. beskrev, hvordan du udfører retro-orbital injektioner. Er dog mere arbejde for at mere fuldt ud at udforske grundlæggende teknikker til forskning i zebrafisk.

Den lille størrelse af zebrafisk en udfordring for forskere at bruge det som en eksperimentel model. Endvidere, givet på grund af små skala, er det vigtigt, at simple teknikker er udviklet til at forskere at undersøge fordelene ved zebrafisk model.

Protocol

1. Protokol tekst Før opsamling zebrafisk blod, er det nødvendigt at forberede bedøvelse vand. Hæld ~ 200 ml akvarievand i en beholder med en 500-ml. Tilsættes ~ 200 g is chips. Temperaturen bør være omkring 4 ° C. Som isspåner smelter, vil det være nødvendigt at tilføje flere isspåner at opretholde en konstant temperatur nær 4 ° C. Når bedøvelse vandet er klar, forberede de nødvendige materialer til opsamling af blod. Sæt en lav retention spids på en P20 pipette og lad pipette, …

Discussion

Denne artikel præsenterer en simpel teknik, der giver yderligere blod og serum analyse i zebrafisk eksperimenter. Denne teknik har potentialet til at bidrage til fremtidige zebrafisk hæmatologiske undersøgelser, der kræver blod parameterdata. Det bør også tillade større anvendelser af zebrafisk som en eksperimentel model.

Denne teknik kræver ikke særlige evner eller gennemførelse af en præcis teknik. Desuden sætter sig to gange den mængde blod, der skal opsamles i forhold til an…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Low retention tips	Applied Biosystems	022493020
Eppendorf Centrifuge 5415D	Eppendorf	Discontinued