Collecte de sang pour analyse biochimique chez le poisson zèbre adulte

Summary

Cet article présente une technique pour la collecte de sang de l'aorte dorsale du poisson zèbre. Il fournit également des instructions pour l'obtention du sérum pour une utilisation dans les analyses biochimiques, tels que les tests pour déterminer le taux de cholestérol et de triglycérides.

Abstract

Le poisson zèbre a été utilisé comme modèle animal pour les études de plusieurs maladies humaines. Il peut servir de plate-forme puissante pour les études précliniques d'événements moléculaires et stratégies thérapeutiques ainsi que pour évaluer les mécanismes physiologiques de certaines pathologies ^1.

Il ya relativement peu de publications relatives à la physiologie du poisson zèbre adulte d'organes et de systèmes ^2, qui peuvent conduire les chercheurs à conclure que les techniques de base nécessaires pour permettre l'exploration des systèmes de poisson-zèbre manque ^3. Hématologiques valeurs biochimiques de poisson zèbre ont d'abord été signalé en 2003 par Murtha et ⁴ collègues qui a employé une technique de collecte de sang d'abord décrit par Jagadeeswaran et ses collègues en 1999. En bref, le sang a été recueilli par une pointe micropipette par une incision latérale, environ 0,3 cm de longueur, dans la région de l'aorte dorsale ^5. En raison des dimensions minute en cause, ceest une technique de haute précision nécessitant un praticien hautement qualifiée. La même technique a été utilisée par le même groupe dans une autre publication dans cette même année ^6. En 2010, Eames et ses collègues ont évalué l'ensemble de la glycémie chez le poisson zèbre ^7. Ils ont eu accès à du sang en effectuant décapitations avec des ciseaux, puis l'insertion d'un tube de prélèvement hépariné microcapillaire dans l'articulation pectorale. Ils mentionnent des difficultés avec l'hémolyse qui ont été résolus avec une température de stockage appropriée basée sur le travail Kilpatrick et al. ^8. Lorsque vous tentez d'utiliser la technique du Jagadeeswaran dans notre laboratoire, nous avons constaté qu'il était difficile de faire l'incision précisément dans le bon endroit pour ne pas permettre à une quantité importante de sang à perdre avant la collecte pourrait être lancé.

Récemment, Gupta et al. ⁹ décrit comment disséquer les organes de poisson zèbre adulte, Kinkle et al. ¹⁰ décrit comment effectuer intraperitoninjections EAL, et Pugach et al. décrit ¹¹ comment effectuer rétro-orbitaires injections. Cependant, plus de travail est nécessaire pour explorer plus à fond les techniques de base pour la recherche chez le poisson zèbre.

La petite taille du poisson zèbre présente des défis pour les chercheurs qui l'utilisent comme un modèle expérimental. En outre, compte tenu de cette petitesse de l'échelle, il est important que les techniques simples sont mis au point pour permettre aux chercheurs d'explorer les avantages du modèle de poisson zèbre.

Protocol

1. Texte du Protocole Avant la collecte de sang le poisson-zèbre, il est nécessaire de préparer de l'eau anesthésiante. Verser ~ 200 ml d'eau de l'aquarium dans un récipient d'une capacité de 500 ml. Ajouter ~ 200 g de morceaux de glace. La température devrait être d'environ 4 ° C. Comme les morceaux de glace fondre, il sera nécessaire d'ajouter des morceaux de glace de plus pour maintenir une température constante de près de 4 ° C. Lorsque l'eau anesthésian…

Discussion

Cet article présente une technique simple qui permet en outre de sang et l'analyse du sérum dans les expériences de poisson-zèbre. Cette technique a le potentiel de contribuer aux études de poisson zèbre futures hématologiques nécessitant des données de paramètres sanguins. Elle devrait également permettre de plus grandes applications du poisson zèbre comme modèle expérimental.

Cette technique ne nécessite pas de compétences particulières ou de mise en œuvre d'une t…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Low retention tips	Applied Biosystems	022493020
Eppendorf Centrifuge 5415D	Eppendorf	Discontinued