Blutentnahme für Biochemische Untersuchungen an adulten Zebrafisch

Summary

Dieser Beitrag stellt eine Methode zur Gewinnung von Blut aus der Aorta dorsalis von Zebrafisch. Es bietet auch Anweisungen für das Abrufen Serum zur Verwendung in biochemischen Analysen, wie etwa Tests zur Bestimmung von Cholesterin und Triglyceriden.

Abstract

Der Zebrafisch ist als Tiermodell für die Untersuchung der verschiedenen menschlichen Krankheiten verwendet. Es kann als leistungsfähige Plattform für die präklinische Studien über die molekularen Ereignisse und therapeutische Strategien sowie für die Auswertung der physiologischen Mechanismen von einigen Pathologien ¹ dienen.

Es gibt relativ wenige Veröffentlichungen im Zusammenhang mit erwachsenen Zebrafisch Physiologie der Organe und Systeme ^2, die führen Forscher zu folgern, dass die grundlegenden Techniken erforderlich, um die Exploration von Zebrafisch-Systeme erlauben es fehlen ³ können. Hämatologische biochemischen Werte des Zebrafisch wurden erstmals im Jahr 2003 von ⁴ Murtha und Kollegen, die eine Blutentnahme Technik zuerst von Jagadeeswaran und Kollegen im Jahr 1999 beschrieben beschäftigt gemeldet. Kurz gesagt, wurde Blut über eine Mikropipettenspitze durch einen seitlichen Einschnitt gesammelt, etwa 0,3 cm in der Länge, im Bereich der dorsalen Aorta ^5. Wegen der winzigen Dimensionen beteiligt sind, diesenist eine hochpräzise Technik, die eine sehr erfahrenen Praktiker. Die gleiche Technik wurde von der gleichen Gruppe in einer anderen Publikation im selben Jahr ⁶ verwendet. Im Jahr 2010 beurteilt Eames und Kollegen ganze Blutzuckerwerte im Zebrafisch ^7. Sie gewannen den Zugriff auf das Blut, indem Enthauptungen mit der Schere und dann Einfügen einer heparinisierten Mikrokapillare Sammlung Schlauch in die Brust Artikulation. Sie erwähnen, die Schwierigkeiten mit Hämolyse mit einem geeigneten Lagertemperatur auf die Arbeit Kilpatrick et al gelöst wurden. ^8. Bei dem Versuch, Jagadeeswaran die Technik in unserem Labor verwenden, fanden wir, dass es schwierig war, den Schnitt in genau der richtigen Stelle machen, wie nicht eine erhebliche Menge an Blut verloren, bevor Sammlung begonnen werden konnte werden lassen.

Vor kurzem Gupta et al. ⁹ beschrieben, wie man erwachsene Zebrafisch Organe, Kinkle et al sezieren. ¹⁰ beschrieben, wie man intraperiton durchführenEAL Injektionen und Tritt durch et al. ¹¹ beschrieben, wie man retroorbitalen Injektionen durchführen. Allerdings sind weitere Anstrengungen erforderlich, um mehr vollständig zu erforschen grundlegende Techniken für die Forschung im Zebrafisch.

Die geringe Größe der Zebrafisch birgt Herausforderungen für die Forscher, sie als ein experimentelles Modell. Des Weiteren sind angesichts dieser Kleinteiligkeit, ist es wichtig, dass einfache Techniken entwickelt werden, damit die Forscher die Vorteile des Zebrafisch-Modell zu untersuchen.

Protocol

1. Protokoll Text Vor dem Sammeln Zebrafisch Blut, ist es notwendig, betäubende Wasser vorzubereiten. Gießen Sie ~ 200 ml Aquarienwasser in einen Behälter mit einem 500-ml Fassungsvermögen. Fügen Sie ~ 200 g Eis-Chips. Die Temperatur sollte etwa 4 ° C liegen Da die Eis-Chips zu schmelzen, wird es notwendig sein, mehr Eisstückchen in den eine konstante Temperatur der Nähe von 4 ° C zu halten Als die betäubende Wasser fertig ist, bereitet die Materialien für die Blutentnahme nötig. Setzen …

Discussion

Dieser Beitrag stellt eine einfache Technik, die weiter Blut und Serum-Analyse im Zebrafisch Experimente erlaubt. Diese Technik hat das Potenzial, zukünftige Zebrafisch hämatologische Untersuchungen, die Blut-Parameter-Daten beitragen. Es sollte auch für größere Anwendungen der Zebrafisch als ein experimentelles Modell zu ermöglichen.

Diese Technik erfordert keine speziellen Fähigkeiten oder Umsetzung einer präzise Technik. Darüber hinaus ermöglicht es die doppelte Menge von Blut g…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Low retention tips	Applied Biosystems	022493020
Eppendorf Centrifuge 5415D	Eppendorf	Discontinued