Blood Collection for biokjemisk analyse i Voksen sebrafisk

Summary

Dette notatet presenterer en teknikk for innsamling av blod fra dorsal aorta av sebrafisk. Det gir også instruksjoner for å få serum til bruk i biokjemiske analyser, for eksempel tester for å bestemme kolesterol og triglyserid nivå.

Abstract

Sebrafisk har blitt brukt som en dyremodell for studier av en rekke menneskelige sykdommer. Det kan tjene som en kraftig preklinisk plattform for studier av molekylære hendelser og terapeutiske strategier samt for å evaluere de fysiologiske mekanismene for noen patologi ^1.

Det er relativt få publikasjoner relatert til voksen sebrafisk fysiologi av organer og systemer ^2, som kan føre forskerne å antyde at de grunnleggende teknikkene som trengs for å tillate utforskning av sebrafisk systemer mangler ^tre. Hematologisk biokjemiske verdier av sebrafisk ble først rapportert i 2003 av Murtha og kolleger ⁴ som ansatt en blod samling teknikk først beskrevet av Jagadeeswaran og kolleger i 1999. Kort, ble blod samles inn via en mikropipette tips gjennom en lateral snitt, ca 0,3 cm i lengde, i regionen av dorsal aorta ^5. På grunn av de ørsmå dimensjoner involvert, detteer en høy presisjon teknikk krever en svært dyktig utøver. Den samme teknikken ble brukt av den samme gruppen i en annen publikasjon i samme år ^6. I 2010 vurderte Eames og kolleger hele blodsukkernivået i sebrafisk ^7. De fikk tilgang til blodet ved å utføre decapitations med saks og deretter sette inn en heparinisert microcapillary samling rør inn i brystregionen artikulasjon. De nevner problemer med hemolyse som ble løst med en passende lagringstemperatur basert på arbeidet Kilpatrick et al. ^8. Når du prøver å bruke Jagadeeswaran teknikk i vårt laboratorium, fant vi at det var vanskelig å gjøre snitt i nøyaktig riktig sted for ikke å tillate en betydelig mengde blod som skal gå tapt før samlingen kunne startes.

Nylig, Gupta et al. ⁹ beskrev hvordan å dissekere voksne sebrafisk organer, Kinkle et al. ^Ti beskrev hvordan de skal utføre intraperitonEAL injeksjoner, og Pugach m.fl. ¹¹ beskrev hvordan å utføre retro-orbital injeksjoner. Det er imidlertid mer arbeid for å mer fullt utforske grunnleggende teknikker for forskning i sebrafisk.

Den lille størrelsen på sebrafisk presenterer utfordringer for forskere som bruker det som en eksperimentell modell. Videre gitt denne smallness av skalaen, er det viktig at enkle teknikker er utviklet for å muliggjøre forskere til å utforske fordelene av sebrafisk-modellen.

Protocol

1. Protokoll Tekst Før samle sebrafisk blod, er det nødvendig å forberede bedøvelse vann. Hell ~ 200 ml akvarium vann i en beholder med en 500-ml kapasitet. Legg ~ 200 g is chips. Temperaturen bør være ca 4 ° C. Som isen chips smelter, vil det være nødvendig å legge mer is chips å opprettholde en konstant temperatur nær 4 ° C. Når bedøvelse vannet er klart, forberede materialer som trengs for blodprøvetaking. Sett en lav-oppbevaring tips på en P20 pipettor og la pipettor der det let…

Discussion

Dette notatet presenterer en enkel teknikk som gjør at ytterligere blod og serum analyse i sebrafisk eksperimenter. Denne teknikken har potensial til å bidra til fremtidige sebrafisk hematologisk studier som krever blod Parameterdataene. Det bør også gi rom for større bruk av sebrafisk som en eksperimentell modell.

Denne teknikken krever ikke spesielle ferdigheter eller gjennomføring av en presis teknikk. Dessuten gjør det opp doble mengden blod samles i forhold til andre teknikker, o…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Low retention tips	Applied Biosystems	022493020
Eppendorf Centrifuge 5415D	Eppendorf	Discontinued