Blodinsamling för biokemisk analys i vuxen Zebrafish

Summary

Detta dokument presenterar en metod för uppsamling av blod från den dorsala aortan hos zebrafisk. Den tillhandahåller också instruktioner för att erhålla serum för användning i biokemiska analyser, såsom tester för bestämning av kolesterol-och triglyceridnivåer.

Abstract

Zebrafisk har använts som en djurmodell för studier av flera humana sjukdomar. Det kan fungera som en kraftfull prekliniska plattform för studier av molekylära händelser och terapeutiska strategier samt för att utvärdera de fysiologiska mekanismer för vissa sjukdomar ^1.

Det finns relativt få publikationer relaterade till vuxna zebrafisk fysiologi organ och system ^2, vilket kan leda forskarna att dra slutsatsen att de grundläggande tekniker som behövs för att möjliggöra undersökning av zebrafisk system saknas ^3. Hematologiska biokemiska värden för zebrafisk först rapporterades 2003 av Murtha och hans kollegor ⁴ som anställd en teknik blodinsamling först beskrivits av Jagadeeswaran och kollegor i 1999. Kortfattat uppsamlades blod via en mikropipett spets genom en tvärgående incision, ca 0,3 cm i längd, i området för den dorsala aortan ^5. På grund av de berörda små dimensioner, dettaär en hög precision teknik som kräver en mycket skicklig utövare. Samma teknik användes av samma grupp i en annan publikation samma år ^6. Under 2010 bedömde Eames och kollegor hela blodsockernivåer i zebrafisk ^7. De fick tillgång till blodet genom att utföra halshuggningar med sax och sedan sätta in en hepariniserat mikrokapillär uppsamlingsrör i bröstmuskeln artikulation. De nämner svårigheter med hemolys som löses med en lämplig förvaringstemperatur bygger på det arbete Kilpatrick et al. ^8. När du försöker använda Jagadeeswaran s teknik i vårt laboratorium, fann vi att det var svårt att göra snittet på precis rätt ställe så att inte tillåta en betydande mängd blod som förloras före insamlingen kunde startas.

Nyligen Gupta et al. ⁹ beskrivs hur man dissekera vuxna zebrafisk organ, Kinkle et al. ¹⁰ beskrivs hur du utför intraperitonEAL injektioner och Pugach et al. ¹¹ beskrivs hur man utför retro-orbital injektioner. Dock mer arbete behövs för att mer fullständigt undersöka grundläggande tekniker för forskning i zebrafisk.

Den lilla storleken på zebrafisk innebär utmaningar för forskare som använder det som en experimentell modell. Dessutom med tanke på denna litenhet skala är det viktigt att enkla tekniker utvecklats för att ge forskarna möjlighet att undersöka fördelarna med zebrafisk modellen.

Protocol

1. Protokoll text Innan samla zebrafisk blod, är det nödvändigt att utarbeta bedövande vatten. Häll ~ 200 ml akvarium vatten i en behållare med en 500-ml volym. Tillsätt ~ 200 g isbitar. Temperaturen bör vara ca 4 ° C. Eftersom de isbitar smälta, kommer det att vara nödvändigt att lägga till fler isbitar att bibehålla en konstant temperatur nära 4 ° C. När bedövande vattnet är klart, förbereda material som behövs för provtagningen. Sätt en låg kvarhållande spets på en P20 p…

Discussion

Detta dokument presenterar en enkel teknik som tillåter ytterligare blod och serum analys i zebrafisk experiment. Denna teknik har potential att bidra till framtida zebrafisk hematologiska studier kräver uppgifter blod parameter. Det bör också möjliggöra större tillämpningar av zebrafisk som en experimentell modell.

Denna teknik kräver inga speciella kunskaper eller genomförande av en exakt teknik. Dessutom möjliggör den upp dubbla mängden blod som skall samlas i förhållande t…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Low retention tips	Applied Biosystems	022493020
Eppendorf Centrifuge 5415D	Eppendorf	Discontinued