Summary

同所性膀胱腫瘍モデルと膀胱内Sarnaの治療の評価

Published: July 28, 2012
doi:

Summary

超音波検査および生物発光イメージングによる膀胱内に配達Sarnaのとモニタリング腫瘍成長の抗腫瘍効果を評価するために同所性膀胱腫瘍モデルを確立します。

Abstract

私たちは、同所移植マウス膀胱腫瘍モデルでは膀胱内に配達小さな活性化RNA(Sarnaの)と膀胱癌を治療するための新たな手法を提案する。マウスモデルは、吸入全身麻酔下に尿道カテーテル法によって確立されます。化学熱傷は、その後膀胱グリコサミノグリカン層を破壊するために膀胱内の硝酸銀溶液を用いた膀胱粘膜に導入され、細胞が付着することを可能にします。滅菌水で数回洗浄後、ヒト膀胱癌KU-7-luc2-GFP細胞は2時間に住むために膀胱にカテーテルを通して注入されています。膀胱腫瘍のその後の成長 、in vivo膀胱超音波および生物発光イメージングによって確認され、監視されています。腫瘍はその後脂質ナノ粒子(LNPs)に策定Sarnaので膀胱内に処理されます。腫瘍の成長は、超音波検査および生物発光で監視されています。この手順のすべてのステップは、添付のビデオで実証されています。

Protocol

動物を対象とする手順は、カリフォルニア大学サンフランシスコ校の動物実験及び利用委員会(IACUC)によって承認されています。 1。細胞調製ヒト膀胱癌細胞株KU-7-luc2-GFP(キャリパーライフサイエンス、ホプキントン、MA)は、10%ウシ胎児血清、50μg/ mlのゲンタマイシンを含むRPMI-1640培地で栽培されています。 培養は37℃で維持され、メディアと5%CO <su…

Discussion

我々は、転写活性化にp21のCIP1/WAF1(P21)のプロモーターを標的とLNP策定Sarnaの腫瘍の膀胱内治療に続いてマウス同所性異種移植膀胱腫瘍モデルの確立のためのプロトコルを提示します。2、3の結果、腫瘍ができる生物発光イメージングと膀胱の超音波で確認し、監視されます。同所性モデルは、より密接に内因性の膀胱癌を近似している尿や尿路上皮の環境を提供することに?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

本研究では、AACRヘンリー·シェパード膀胱がん研究助成金(09から60-30-LI)によって運営されている。

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
KU-7-luc-GFP cells Caliper 128091  
thymic nude mice ( nu/nu) Simonsen Laboratories 6-7 weeks old Sim:(NCr) nu/nu fisol
Ultrasound unit Visualsonics Vevo 770 RMV-704 probe
Bioluminescence unit Caliper IVIS Spectrum
Exel safelet catheter Fisher 14-841-21 24G X ¾”
Silver nitrate Sigma S8157
Hamilton syringe Hamilton company 80301
LNP-saRNA Alnylam Pharmaceuticals

Table 1. Specific reagents and equipment.

References

  1. Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
  2. Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 17337-17342 (2006).
  3. Chen, Z. Antitumor effect of dsRNA-induced p21(WAF1/CIP1) gene activation in human bladder cancer cells. Molecular cancer therapeutics. 7, 698-703 (2008).
  4. Chancellor, M. B. Preliminary results of myoblast injection into the urethra and bladder wall: a possible method for the treatment of stress urinary incontinence and impaired detrusor contractility. Neurourology and urodynamics. 19, 279-287 (2000).
  5. Hadaschik, B. A. A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging. BJU international. 100, 1377-1384 (2007).
  6. Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. Mouse Bladder Wall Injection. J. Vis. Exp. (53), e2523 (2011).
  7. Dobek, G. L., Godbey, W. T. An Orthotopic Model of Murine Bladder. Cancer. J. Vis. Exp. (48), 2535 (2011).
  8. Dinney, C. P. Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice. The Journal of urology. 154, 1532-1538 (1995).
check_url/4207?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Kang, M. R., Yang, G., Charisse, K., Epstein-Barash, H., Manoharan, M., Li, L. An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment. J. Vis. Exp. (65), e4207, doi:10.3791/4207 (2012).

View Video