Summary
Kanıt yoktur birikmektedir, bu iskemik ön (PC) - beyne olmayan bir zarar iskemik meydan okuma - bir sonraki zarar iskemik hasara geçici bir koruma bahşeder. Biz C57Bl6 / J farelerde geçici fokal serebral iskemi (orta serebral arter tıkanıklığı, MCAO neden olduğu) için erken iskemik tolerans (IT) ikna etmek için bir ön hazırlık uyarıcı olarak ikili karotis arter tıkanıklığı (BCCAO) kurdu.
Abstract
Kanıt yoktur birikmektedir, bu iskemik ön - beyne olmayan bir zarar iskemik meydan okuma - bir sonraki zarar iskemik hasara geçici bir koruma bahşeder. Biz C57Bl6 / J farelerde geçici fokal serebral iskemi için erken iskemik toleransı ikna etmek için bir ön hazırlık uyarıcı olarak ikili karotis arter tıkanıklığı kurduk. Bu videoda, bu çalışma için kullanılan metodolojiyi ortaya koyacak.
Introduction
İskemik inme, yüksek mortalite ve büyük bir sosyo-ekonomik yükü 1 ile bir hastalıktır. Son yıllarda boyunca yoğun deneysel ve klinik bilimsel çabalarına rağmen, akut iskemik inme hastaları için tedavi seçenekleri 2 çok sınırlı kalır. Bunun aksine, gelişmiş ülkelerde yaşlı insanların yüzdesi artması önemli ölçüde önümüzdeki yıllarda 3 iskemik inme hastalarının insidansı ve prevalansı artacaktır. Bu nedenle, iskemik inmeli hastalarda yeni tedavi stratejileri için acil bir ihtiyaç vardır.
Bir yaklaşım bir zararlı uyaran ile başa çıkmak için beyin endojen adaptasyon mekanizmaları daha fazla anlayış kazandırmaktır. Bu, beyin türevli nöro da iskemik ön (PC) veya iskemik tolerans (IT) olarak bilinen ve beyne uygulanabilir olmayan bir zarar zararlı uyaran geçici bir direnç neden olan bir olgu, açıklamaktadırBir sonraki zararlı İşemi 4'e karşı. BT erken, PC sonra birkaç saat dakika içinde ortaya çıkar ve 4 meydana birkaç saat bir gecikme ihtiyacı olan, IT gecikmiş: BT iki farklı zaman pencere ortaya çıkar.
Şimdiye kadar, beyin BT araştırma BT gecikmeli odaklanmıştır. Daha az BT erken mekanizmaları tarafından bilinir. Bu çalışmanın amacı, yeterli bilgisayar uyarıcı olarak, BT gecikmiş endüklemek için kurulmuş bir uyarıcı teşvik etmektir ikili karotis arter tıkanıklığı (BCCAO) kurmaktır geçici fokal serebral iskemi (orta serebral arter tıkanıklığı ile oluşturulan, MCAO) BT erken C57Bl6 içinde / J fareler.
Her iki cerrahi işlemler sırasında (BCCAO ve MCAO), lazer Doppler flowmetre (LDF) tarafından serebral kan akımının izleme (CBF) yapıldı.
BCCAO anestezi ve kendiliğinden solunum farelerinde gerçekleştirilmiştir. Her iki karotis arter (CCA) maruz bırakıldıve 60 saniye boyunca tıkanır takılmasından sonraki 5 dakika izledi. Bu BCCAO / reperfüzyon dizisi iki kez tekrarlandı. Ameliyattan sonra, fare hızla iyileşti ve işlevsel bozulma belirtisi gösterdi. BCCAO protokol beyinde gecikmiş hücre ölümü neden yoktu yukarıda tarif, ekarte etmek için, biz bir de BCCAO sonra 72 saat boyama bir TdT-aracılı dUTP-biotin nick sonuna etiketleme (TUNEL) (veya sahte cerrahi) yapılan ayrı bir grup.
MCAO 5-7 kemirgenlerde fokal serebral iskemi indüksiyon için yaygın olarak kurulmuş bir modeldir. Cerrahi işlemler standart operasyon prosedürleri (SOP) 8 kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Sol CCA açığa sonra, silikon kaplı monofilament böylece anterior serebral arter (ACA) kadar Willis poligonu içine internal karotid arter (ICA) ile gelişmiş ve distal CCA, orta serebral arter kökeni (içine tanıtıldı MCA) zaman belirli bir süre için kapatıldı. Bu çalışmada,genellikle striatal ve kortikal beyin alanları içeren MCA topraklarında bir iskemik lezyon neden MCAO içinde kullanılan 45 dakika,.
Çalışmamızda, erken BT PC uyarıcı olarak BCCAO kullanarak zamansal profilini analiz. Bizim veri BCCAO ve MCAO arasındaki en uygun zaman gecikmesi BT 30 dk erken ikna etmek olduğunu, belirtti.
Bu videoda, ikimiz de cerrahi işlemler, yani BCCAO ve MCAO bir gösteri verecektir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bu makalede açıklanan tüm işlemler Landesamt für Gesundheit und Soziales, Berlin, Almanya kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı.
Ön cerrahi işlemler
1. Mono iplik hazırlanması
- Lümen içi filamanların hazırlanması için, 8-0 naylon monofilament dikiş kullanıldı ve 13 mm uzunlukta, her biri için kesilmiştir.
- Monofilament kaplama için, Xantopren M mukoza, (Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Almanya) aktivatör solüsyonu (Aktivatör, Universal artı, Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Almanya) bir damla eklenerek aktive kullanılmıştır.
- Bu tamamen kaplanana kadar yavaşça monofilaman silikon ile çekildi. Böyle yaparak, monofilament eşit silikon kaplı olacaktır. Aktif kaplama malzemesi hızlı sağlam ve kuru olacak, çünkü çok uzun bekleme kaçının.
- Silikon katılaşmaya başlamadan önce, Bu bir kağıt üzerine çekerek filament gelen aşırı silikon kapalı şerit tavsiye edilir. Böyle yaparak, silikon tabaka 200 mikron yaklaşık kalınlığı dışarı inceltilebilir.
- Silikon kaplı monofilament temel bir gecede kuruması için modelleme kil içine sıkışmış oldu.
Yorum: İdeal olarak, sadece sterilize ya da en azından dezenfekte monofillerden cerrahi alanda kısırlık sağlamak için kullanılmalıdır. Monofillerden kalitesini 9 kötüleştirebilir çünkü Uygulamada, el yapımı monofilament sterilizasyon ve dezenfeksiyon çok zordur. Bu nedenle, bunun yerine ticari olarak temin edilebilen steril monofilamentler kullanmak tercih olabilir.
2. Cerrahi Aletler ve Hayvanlar hazırlanması
- Tüm cerrahi aletler% 70 etil alkol tutuldu. Ayrıca, önce her yeni cerrahi işlem için, tüm cerrahi aletler dikkatli bir şekilde temizlenennd% 70 etil alkol kullanarak dezenfekte.
- Cerrahi alan iyice transection önce tüm hayvanlarda% 70 etil alkol kullanarak dezenfekte edildi. Dezenfekte siteleri tamamen kesiler yapmadan önce kurumaya izin verildi. Bu microabrasions ve sonraki deri iltihabı 9 neden olabilir kürk ek kırpma yapılmadı.
Cerrahi işlemler
3. LDF Probe ve LDF İzleme Konumlandırma
- Indüksiyonu için, farenin bir buharlaştırıcı kullanılarak% 30 oksijen,% 70 N2 O ve% 2.5 izofluran oluşan bir gaz karışımı için maruz bırakılmıştır. Anestezi bakımı için, izofluran konsantrasyonu% 1.5 'e düşürülmüştür. Fareler cerrahi işlem boyunca maske solunum yoluyla kendiliğinden nefes edildi.
- Bir rektal ısı probu yerleştirildi ve fareler parietal baş açığa stereotaktik çerçevesine tespit edildi. Ameliyat sırasında, fareler üzerinde duran edildiTermostat kontrollü bir ısıtma yastığı, ± 0.5 ° C sıcaklıkta 37.0 sabit bir çekirdek sıcaklığı sağlamak Bir sagital orta hat kesi (~ 1 cm uzunluğunda) parietal kafatası ortaya çıkarmak için yapıldı.
- Kafatasının sol tarafında dikkatle disseke ve bir fiberoptik prob anında yapıştırıcı kullanarak bregma gelen kafatası 2 mm kaudal ve 5 mm yanal doğrudan tespit edildi. Daha sonra, yara kenarları dikkatle beyin hipotermi hem de enfeksiyonları önlemek için uyarlandı.
- Fare boynun ventral tarafında ortaya çıkarmak için etrafında döndü. Fiberoptik prob prob adaptörü (; Järfälla, İsveç Yüksek Lisans Probe 418-1, Perimed) bağlantı üzerinden LDF cihazı (PeriFLUX Sistemi 5000, Perimed, Järfälla, İsveç) bağlanmıştır.
Yorum: çevresinde fareyi döndürürken, fiberoptik prob bu kafatası kırılır bu önlemek için dikkatle bükülmüş olmalıdır.
- LDF cihazı bir dizüstü bilgisayar com bağlandıbilgisayar. LDF değerlerin sürekli kayıt Windows (Sürüm 2.50, Järfälla, İsveç) için PeriSoft kullanılarak başlatılmıştır. Şekil 1 BCCAO ve reperfüzyon sırasında on LDF kayıtları elde edilen ortalama CBF seyir gösterir.
4. İkili Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı
- 3.1 'de tarif edildiği gibi anestezi muhafaza edilmiştir. Fare sırtında yerleştirildi. Hayvanın kuyruk ve pençeleri yapışkan bant kullanarak ısıtma yastığı tespit edildi. Bir sagittal ventral orta hat kesi (~ 1 cm uzunluk) yapıldı.
- Her iki tükrük bezleri dikkatli bir şekilde ayrılmış ve temel CCA en görselleştirmek için seferber edildi.
- Her iki CCA en dikkatli bir şekilde, bu yapıların zarar vermeden ilgili vagal sinir ve venler ayrıldı. Vagal sinir manipülasyon önemli kardiyak dizi oluşumu için potansiyeline sahip parasempatik sinir sistemi, geçici veya kalıcı fonksiyon bozukluğu neden olabilirhythmia hatta geri dönüşü olmayan kalp durması. Bu nedenle, vagus sinir herhangi bir manipülasyon önlemek için çok önemlidir. Gevşek bir 5-0 ipek sütür döngü her CCA etrafında yapıldı.
- Küçük bir silikon tüp (çapı 2 mm) CCA ve her iki tarafta ipek dikişler arasında yerleştirildi. Bu boru sütür (Şekil 4) sıkılır zaman arter duvarlarının zarar önlemek için CCA en bir splint olarak kullanılmıştır.
- Her iki CCA en ipek dikişlerle sıkarak bir dakika için tıkanmıştır. LDF sinyali Başlangıç sinyali ile <% 10 düşürülmüştür içinde sadece farenin, çalışmaya dahil edildi. Her iki CCA en yeniden açılması sonra, beş dakika reperfüzyon dönemi başlatılmıştır. LDF tarafından tam reperfüzyon sağlanmıştır. Eksik reperfüzyon (bazal CBF göre CBF yani <% 90 iyileşme) ile hayvan alınmadı. BCCAO bir dakika ve reperfüzyon beş dakika arasında sırası, toplam BCCAO durati için iki kez tekrarlandı3 dk üzerinde. Şekil 1, BCCAO ve reperfüzyon esnasındaki on LDF kayıtları elde edilen ortalama kan akımında yollarını göstermektedir. İşlem sırasında, bu boyun serum fizyolojik kullanılarak ıslak yara tutmak için tavsiye edilir.
- Son reperfüzyon sonra tüm boru ve sütürler gibi kafatasına fiberoptik prob çıkarıldı, yaraları dikildi ve lidokain merhem (Xylocain% 2 AstraZeneca GmbH, Wedel, Almanya) için gerektiği kadar tekrar tekrar yaralar uygulandı analjezik yönetimi.
- Fare Önceden ısıtılmış aktarılmıştır (30 ° C) kurtarma kutusu (MediHEAT. İngiltere Ltd Brough, Cumbria, PecoServives) onlar tam bilinci yerine dek. Bundan sonra, farelerin hayvan kafesleri döndü.
5. Orta Serebral Arter Tıkanıklığı
- Fare yeniden anestezi vardı, bir rektal ısı probu yerleştirildi ve fareler boynun ventral tarafında ortaya çıkarmak için bir ısıtma yastığı yerleştirilmiştir. Daha sonra, wERE BCCAO bölümünde açıklandığı gibi sabitlenmiştir.
- Uzun 7-0 ipek sütür kullanarak kalıcı bir bağ sol proksimal CCA etrafında yapılmış ve iplik hafifçe bir sivrisinek kelepçe (Şekil 4) ile kaudal çekildi.
- Başka bir kalıcı bağ sol eksternal karotis arter (ECA) ve diş (Şekil 4) hayvanın sağ tarafına doğru çekildi civarında yapıldı.
- Sol ICA çevreleyen bağ dokusu dikkatli bir şekilde seferber oldu ve hipoglossal sinir hafifçe ICA distal tabii ki iyi bir bakış elde etmek için kaldırıldı. Sol sol ICA virajlı pterigopalatin arter (KİK) doğru (Şekil 4) proksimal ICA seyrini takip ederken.
Yorum: kaudal yönde doğru döner hangi tespit edilmesi başka bir arter vardır. Bu değişken CCA çatallanma veya pr gelen ya kaynaklanan oksipital arter,ECA'nın oximal kısmı (Şekil 4).
- Gevşek bir dikiş döngü bir 5-0 ipek iplik kullanarak proksimal ICA etrafında yapıldı.
- Küçük bir mikrovasküler kelepçe kullanarak, ICA geçici olarak 5-0 gevşek dikiş döngü (Şekil 4) distale kapatıldı.
- Küçük bir kesi sadece mikrovasküler makas (Şekil 4) kullanarak CCA çatallanma önce CCA distal bölümünde yapıldı.
- Bir önceden seçilmiş silikon kaplı monofilament küçük bir kesi ile CCA girmiş ve mikrovasküler kelepçe (Şekil 4) durdu kadar ICA içine itildi.
- Bu (Şekil 4) durana kadar monofilament ICA derin gelişmiş iken microclamp dikkatli, ICA çıkarıldı. Yorum: Eğer bir kalem gibi tutmayın ki bu noktada, sol elinde forseps çevirin. Bu daha kolay forseps ile iplik kapmak için yardımcı olur.Kelepçe-aplikatör vasküler sağ elinde tutulmalıdır. Bu yaklaşık kesi taraftan kanamayı önlemek amacıyla ICA etrafında gevşek 5-0 sütür sıkılması için gerekli olabilir.
- Monofilament ucunun tam konumu ICA içine değil, PPA içine gelişmiş olup olmadığını kontrol etmek için tespit edilmiştir. Monofilament ucu proksimal KİK girmiş ise, filament hafifçe sadece ICA / KİK çatallanma önce geri çekildi. Bu hafifçe sağ tarafa proksimal ICA biraz çekerken, tekrar ICA içine monofilament ilerlemek için denendi. Böyle yaparak, distal ICA doğal seyrini daha kolay ICA erişmek için yapım simüle edilmiştir.
- Monofilamanın neredeyse tamamen ICA ilerletildi sonra, proksimal ICA etrafında gevşek 5-0 sütür döngü yerinde filaman tutmak amacıyla sıkıştırıldı. Daha sonra, tüm ipek konuları kısaltılmış ve cilt yara dikildi.
- Ameliyat esnasında, sıvı kaybı Replen edildiBu tam bilinci yerine gelene kadar, normal tuzlu su çözeltisi, 1.0 ml ip enjekte edilerek ished, fare önceden ısıtılmış kurtarma kutusuna transfer edildi.
- Reperfüzyon, fareler yeniden anestezi edildi ve monofilaman dikkatlice proksimal ICA etrafında 5-0 ipek sütür söküldükten sonra uzaklaştırılmıştır. Daha sonra, 5-0 dikiş kanamayı önlemek için dikkatli bir şekilde tekrar sıkılaştırıldı.
- Tam hemostaz onay alındıktan sonra, boyun yara dikildi.
- Ağrı kesici için gerektiği gibi lidokain merhem tekrar tekrar deriye lokal olarak uygulandı ve tam bilinci yerine kurtarma kutusu kadar fare önceden ısıtılmış (° C 30) nakledildi.
- Başarılı bir MCAO işlemi için bir birinci ipucu, hayvanın çizerek bir saat gözlendi gibi. Fonksiyonel açığın şiddeti fareler 10 için modifiye Bederson skoru kullanılarak ölçüldü. Bu modifiye Bederson puanına göre, nörolojik puanları biz0 (normal motor fonksiyon), 1 (fare kuyruk tarafından kaldırıldı gövde ve kontralateral ön ayakları fleksiyon), 2 (fare düz bir yüzeye kuyruk tarafından düzenlenen zaman karşı tarafa çizerek, ancak normal: yeniden aşağıdaki puanlar istirahat duruş), 3 (istirahat karşı tarafa eğilerek) ve 4 (spontan motor aktivite ya da ölü).
6. BCCAO Sham Cerrahi
BCCAO sahte prosedürleri için, fareler gerçek BCCAO PC prosedür süresince anestezi vardı, tükürük bezleri harekete geçirildi ve CCA en maruz bırakıldı. Bu karotid arter veya vagal sinirler doğrudan manipülasyon sahte işlem sırasında kaçınılması çok önemlidir. CCA İşlemler endotel veya arteriyel lümen içinde yerel tromboz neden gelen vazoaktif bileşiklerin bir sürümü neden olabilir ki, onun endotel tabakası zarar verebilir. Bunun bir sonucu olarak, tromboembolik olaylar sahte ameliyat sonrası ortaya çıkabilir. Bu th önemli bir karıştırıcı faktör olacaktıre prosedürü. Öte yandan, vagal sinir manipülasyon önemli kardiyak aritmi ve hatta geri dönüşü olmayan kardiyak arrest oluşması için potansiyeline sahip parasempatik sinir sistemi, geçici veya kalıcı fonksiyon bozukluğuna yol açabilir. Bu nedenle, bu BCCAO sırasında vagus sinir herhangi bir manipülasyon önlemek için çok önemlidir.
Post-cerrahi
7. Hacim Ölçümü enfarkt
Infarkt boyutları değerlendirilmesi için, fareler MCAO sonra 72 saat hayatta. Daha sonra hayvanlar derin anestezi vardı, beyinleri çıkarıldı, infarkt hacim ölçümleri için hematoksilen (Papanicolau en protokolünü kullanarak) ile, metilbutan ek bileşenini dondurulmuş kesitli ve lekeli. Beyin bölümlerinde, bir görüntü analiz cihazı (MCID çekirdek 7.0 Rev.2.0, GE Healthcare Niagara Inc) kullanılarak belirlendi ve Lin ve arkadaşlarının yöntemine göre ödem için düzeltilir 600 mikron-aralıkları ve infarkt hacmi toplanmıştır. 7,11
8. Katılım Kriterleri
Biz üç BCCAO bölüm her sırasında fazla% 90 oranında bir LDF-ölçülen CBF azalma vardı sadece hayvanlar dahil. İdeal olarak, LDF izleme BCCAO sırasında her iki serebral hemisferde yapılmalıdır. Uygulanabilirliği için, sadece daha sonra MCAO tabi olacak sol hemisfer, LDF izleme yapılmaktadır. Bu yaklaşım, 6,12 daha önce tarif edilmiştir. Her BCCAO bölüm sonra reperfüzyon (bazal değerlere yani dönüş) tam olması gerekirdi. Süresi fareler anestezi altında tutuldu zaman azaltılması nedeniyle, MCAO ameliyat sırasında CBF takip etmedi. Ancak hayvanların ayrı bir grup ile bir pilot çalışmada, MCAO ameliyat sırasında LDF tarafından CBF izlenir. Farelerin Bu grupta, sürekli CCA tıkanıklığı önce başlangıca göre% 90 CBF bir azalma ölçülmüştür. Buna ek olarak, monofilamentlerin CBF çıkarılmasından sonra ilgili>% 90 geri kazanılabilirCCA tıkanıklığı sonra bazal değerleri. Bu LDF kriterleri tutarlı infarkt hacimleri 7 edebiyat ve sonucu kurulmuştur. Biz sadece en az MCAO sonra anestezi kurtarma sonra 1 bir Bederson skoru hayvanlar dahil. Ayrıca, MCAO ve sonra 72 saat için hayatta sadece hayvanların kafa içi kanama belirtisi alındı gösterdi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Her iki CCA adlı (Şekil 1) tıkalı zaman bizim BCCAO protokolü (>% 90) acil ve derin CBF indirimleri sonuçlandı. CCA yeniden açılması LDF (Şekil 1) ile takip olarak reperfüzyon tamamlamak için yol var. PC sonra, hayvanlar fonksiyonel özürlülük belirtisi gösterdi. Ayrıca, mortalite yoktu. TUNEL boyama hayvan ayrı bir grup içinde BCCAO sonra 72 saat yapılan BCCAO (veriler gösterilmemiştir) sonra beyinde gecikmiş hücre ölümü belirtisi gösterdi.
BT (Şekil 2) erken BCCAO ve MCAO arasındaki en uygun zaman gecikmesi zamansal profilini analiz ederken, biz Sham grubu (n = 10) göre infarkt hacimleri (% 65, n = 10 azalma) belirgin bir azalma bulundu BCCAO MCAO 30 dakika önce yapıldı zaman. BCCAO MCAO (n = 10) önce 2 saat ve 24 saat sonra uygulandı Dahası, enfarktüs hacmi düşürülmüştür. 24 saat BT 6 yılının ikinci (gecikmeli) zaman penceresi temsil eder. >
Bu nedenle, erken BT PC uyarıcı olarak BCCAO kullanmak için en uygun zaman penceresi geçici fokal serebral iskemi (MCAO) indüksiyonundan 30 dakika önce olduğu söylenebilir.
Şekil 1. BCCAO ve reperfüzyon (n = 10) sırasında LDF ile ölçülen ortalama CBF değerleri Ders.
Şekil 2. BCCAO n = 10/group sonra MCAO farklı zaman gecikmeleri de infarkt hacimleri zamansal Profil, grafikler görüntülemek ortalama ± standart sapma, sahte dan * p <0,05, sahte gelen ** p <0,01 (tek yönlü ANOVA ile Bonferroni posthoc testi).
3 "src =" / "fo: içerik-width =" files/ftp_upload/4387/4387fig3.jpg 6in "fo: src =" / files/ftp_upload/4387/4387fig3highres.jpg "/>
Şekil 3,. Türetilen Örnek hematoksilin-Lekeli beyin kesitleri, bir BCCAO-koşullanan (A) ve BCCAO / plasebo sonra 45 dakika MCAO'dan 30 dakika tabi tutuldu, bir sham hayvan (B). Brain MCAO sonra 72 saat çıkarıldı ve işlendi.
Şekil 4. BCCAO ve MCAO için yapılan işlemler de dahil olmak üzere, sol karotis arter en vasküler anatomi şeması.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bizim çalışmamızda, BCCAO üç dizileri, her bir dakika süren ve beş dakika boyunca reperfüzyon ile, daha erken teşvik etmek için yeterli bir iskemik bilgisayar uyarıcı olduğunu göstermiştir.
Ayrıca, kullanılan ön hazırlık protokolü kayda değer bir postoperatif morbidite ile güvenli ve küçük invazif bir yöntem, beyin apoptoz ve mortalite belirtisi olduğunu göstermiştir. Birkaç farklı ön koşullandırma protokol daha önce 6-7,12 tarif edilmiştir. Diğer bir ön hazırlık uyarıcı 13-14 olarak BCCAO 6 dk kullandık. Ancak, üç kez BCCAO bir dakika herhangi bir tespit iskemik beyin hasarı olmadan BT erken zaman penceresinde bir koruyucu etkisi sonuçlandı olması nedeniyle, biz bu protokolü kullanmaya karar verdi.
Tutarlı sonuçlar, anestezi ve cerrahi süresi yanı sıra hayvan ağırlıkları, beyin sıcaklık gibi diğer değişkenler içinAmeliyat sırasında, cerrahi sonrası sıvı ikmal, cerrahi sonrası ağrı yönetimi hem de öncesi ve cerrahi sonrası kafes zenginleştirme 15 standardize edilmelidir. Hipoterminin bir ön koşullandırma bir etkiye sahiptir ve bu nedenle, BCCAO etkisinin 16 engelleyebilir için özel bir dikkat anestezi tam dönemi boyunca fareler normotermik koşullarının bakım gerektirir. Uyanık ve serbestçe hareket kemirgenlerde, çekirdek sıcaklıkları yaklaşık olarak karşılık gelen beyin sıcaklıkları 17 daha yüksek santigrat 0.5 ila 1 derece bulunmaktadır. Uyanık ve serbestçe hareket eden kemirgenlerde dinlenme beyin sıcaklık 18 santigrat yaklaşık 36.5 derece olan. Bizim deneylerde beyin sıcaklıkları ölçmek değil, biz 37.0 fareler 'çekirdek sıcaklıkları ayarlanabilir ± yukarıda belirtilen dinlenme beyin sıcaklıkları benzer beyin sıcaklıkları elde etmek için 0,5 derece santigrat.
Teorik olarak, uçucu anestezik kullanımıkendini izofluran BT neden olduğunu göstermiştir, çünkü kendini bir ek karıştırıcı faktör olabilir. Bununla birlikte, izofluran anestezi çalışmada 19-21 tarif edilen prosedürlerde durumda değildi birkaç saat boyunca tekrar tekrar tatbik sadece ilgili bir bilgisayar uyaran haline gelir. Ayrıca, biz de izofluran anestezi potansiyel karıştırıcı etkisini kontrol etmek Sham-çalışan hayvanlar analiz.
MCAO indüksiyonu için kullanılan monofilament boyutu ve şekli çok önemli bir rol oynar. Kör filamentler 22 ısıtmak göre eşit silikon filamentler MCAO başarı oranını artırmak ve bu subaraknoid kanama gibi komplikasyon oranını azaltmak kaplı ve bu nedenle tercih edilmelidir. Başka bir önemli nokta filament uzunluğudur. 9-11 mm arasında optimal elyaf uzunlukları 15 rapor edilmiştir. Bizim kesiler CCA çatallanma proksimalinde yapılan olması nedeniyle, bir monofilament len kullanılan13 mm ve yaklaşık 200 mikron arasında kalınlığa sahip GTH.
Birlikte ele alındığında, monofilament en kaplama ve uzunluğu türünü ve kalitesini MCA yeterli bir tıkanıklık sağlamak ve ön iletişim arter yoluyla önemli çapraz akışlı önlemek için çok önemlidir. Böylece önemli infarkt hacminin istenmeyen bir azalma Willis sonuçlarının Circle sağ taraftan çapraz akışlı ve sonuçları 23 değişkenliği artırır. Sonuç değişkenliği daha da azaltmak için amacıyla ek usul standardına LDF tabanlı CBF MCAO sırasında izleme ve reperfüzyon ve ticari endüstriyel yapılan standart monofilament kullanımını içerir. Ticari olarak temin edilebilen monofilament kullanılması ile aynı zamanda steril sağlanmış olur.
Buna ek olarak, hangi hayvanlar BCCAO veya MCAO sırasında> 90% CBF azalma yok, ya da arterlerin yeniden açılması site sonra>% 90 reperfüzyon yok kild çalışma dışı edilebilir. Bu yaklaşım, esas olarak serebral kollateral dolaşım ortak varyantları bir sonucu olarak ortaya çıkar infarkt hacimleri, değişkenlik azaltmaya yardımcı olacaktır.
Özet olarak, BCCAO erken ve geç zaman pencerelerinde BT etkilerini araştırmak amacıyla kurulmuş bir ve kolay uygulanabilir bir modeldir. BT olgusu incelenmesi beyinde endojen koruma altında yatan mekanizmaları daha iyi anlamak için yardımcı olur. Bakış açısından, bu akut iskemik inme hastaları için alternatif bir tedavi fırsatlarını geliştirmek için yardımcı olabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Biz ifşa hiçbir şey yok.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Binocular surgical microscope | Zeiss | Stemi 2000 C | |
| Light source for microscope | Zeiss | SteREO CL 1500 ECO | |
| Heating pad with rectal probe | FST | 21061-10 | |
| Stereotactic frame | David Kopf | Model 930 | |
| Scissors | FST | 91460-11 | |
| Dumont forceps #5 | FST | 11251-10 | |
| Dumont forceps #7 | FST | 11271-30 | |
| Mircovascular clamp | FST | 00398-02 | |
| Clamp applicator | FST | 00072-14 | |
| Springscissors | FST | 15372-62 | |
| Needle holder | FST | 12010-14 | |
| Needles | Feuerstein, Suprama | BER 562-20 | |
| 5-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | ||
| 7-0 silk suture | Feuerstein,Suprama | ||
| 8-0 silk suture | Feuerstein, Suprama |
References
- Roger, V. L., et al. Heart disease and stroke statistics--2011 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 123, e18-e209 (2011).
- Khaja, A. M., Grotta, J. C. Established treatments for acute ischaemic stroke. Lancet. 369, 319-330 (2007).
- Foerch, C., Sitzer, M., Steinmetz, H., Neumann-Haefelin, T. Future demographic trends decrease the proportion of ischemic stroke patients receiving thrombolytic therapy: a call to set-up therapeutic studies in the very old. Stroke. 40, 1900-1902 (2009).
- Gidday, J. M. Cerebral preconditioning and ischaemic tolerance. Nat. Rev. Neurosci. 7, 437-448 (2006).
- Atochin, D. N., Clark, J., Demchenko, I. T., Moskowitz, M. A., Huang, P. L. Rapid cerebral ischemic preconditioning in mice deficient in endothelial and neuronal nitric oxide synthases. Stroke. 34, 1299-1303 (2003).
- Cho, S., et al. Obligatory role of inducible nitric oxide synthase in ischemic preconditioning. J. Cereb. Blood. Flow Metab. 25, 493-501 (2005).
- Kunz, A., et al. Neurovascular protection by ischemic tolerance: role of nitric oxide and reactive oxygen species. J. Neurosci. 27, 7083-7093 (2007).
- Dirnagl, U., et al. Standard operating procedures (SOP) in experimental stroke research: SOP for middle cerebral artery occlusion in the mouse. Nature Precedings. , (2010).
- Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J. Vis. Exp. (47), e2423 (2011).
- Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17, 472-476 (1986).
- Lin, T. N., He, Y. Y., Wu, G., Khan, M., Hsu, C. Y. Effect of brain edema on infarct volume in a focal cerebral ischemia model in rats. Stroke. 24, 117-121 (1993).
- Kawano, T., et al. iNOS-derived NO and nox2-derived superoxide confer tolerance to excitotoxic brain injury through peroxynitrite. J. Cereb. Blood Flow Metab. 27, 1453-1462 (2007).
- Qi, S., et al. Sublethal cerebral ischemia inhibits caspase-3 activation induced by subsequent prolonged ischemia in the C57Black/Crj6 strain mouse. Neurosci. Lett. 315, 133-136 (2001).
- Wu, C., et al. A forebrain ischemic preconditioning model established in C57Black/Crj6 mice. J. Neurosci. Methods. 107, 101-106 (2001).
- Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. Rodent Stroke Model Guidelines for Preclinical Stroke Trials (1st Edition). J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).
- Nishio, S., et al.
- DeBow, S., Colbourne, F. Brain temperature measurement and regulation in awake and freely moving rodents. Methods. 30, 167-171 (2003).
- Colbourne, F., Sutherland, G. R., Auer, R. N. An automated system for regulating brain temperature in awake and freely moving rodents. J. Neurosci. Methods. 67, 185-190 (1996).
- Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism? Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).
- Li, L., Zuo, Z. Isoflurane preconditioning improves short-term and long-term neurological outcome after focal brain ischemia in adult rats. Neuroscience. 164, 497-506 (2009).
- Xiong, L., et al. Preconditioning with isoflurane produces dose-dependent neuroprotection via activation of adenosine triphosphate-regulated potassium channels after focal cerebral ischemia in rats. Anesth. Analg. 96, 233-237 (2003).
- Spratt, N. J., et al. Modification of the method of thread manufacture improves stroke induction rate and reduces mortality after thread-occlusion of the middle cerebral artery in young or aged rats. J. Neurosci. Methods. 155, 285-290 (2006).
- Zarow, G. J., Karibe, H., States, B. A., Graham, S. H., Weinstein, P. R. Endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in rats: effect of suture insertion distance on cerebral blood flow, infarct distribution and infarct volume. Neurol. Res. 19, 409-416 (1997).
