Summary
Her beskriver vi en lys-mørk preferanse test for Drosophila larve. Denne analysen gir informasjon om medfødte og circadian regulering av lys sensing og behandling photobehavior.
Abstract
Lys fungerer som miljø-signal for å styre dyrs atferd på ulike nivåer. Drosophila larve nervesystemet blir brukt som en unik modell for å svare på grunnleggende spørsmål om hvordan lyset informasjon behandles og deles mellom raske og circadian atferd. Drosophila larver vise en stereotype unngåelsesatferd når de utsettes for lys. For å undersøke lys avhengige atferd forholdsvis enkle lys-mørke preferanse tester kan brukes. I virveldyr og leddyr nervebaner som er involvert i sanse og behandle visuelle innganger delvis overlapper med de prosessering photic circadian informasjon. Den spennende spørsmålet om hvordan lyset følersystem og cirkadisk system samhandler for å holde atferdsmessige utganger koordinert stort sett forblir uoppdaget. Drosophila er en påvirker biologisk modell for å nærme seg disse spørsmål, på grunn av et lite antall av neuroner i hjernen og tilgjengeligheten av genetiske verktøy for neuronal manipulasjon. Den presenterte lys-mørke preferanse analysen gjør at etterforskningen av en rekke visuelle atferd inkludert circadian kontroll over phototaxis.
Introduction
Her beskriver vi et atferdsmessig analysen basert på larvenes preferanse for mørk (eller lys). Larver reagerer med en sterk og stereotyp photonegative respons under beite stadier (L1 til tidlig L3) 1. Analysen er beregnet til å vurdere photophobic oppførselen til larven og sammenligner den lyse eller mørke preferanse for en gruppe larver bevege seg fritt i en petriskål belagt med agar. Dette atferdsmessige analysen ikke bare gir informasjon om følsomhet, integrering og temporal plastisitet av det visuelle system, gir det ytterligere tips om hvordan lysfølsomhet og prosessen styres av den biologiske system.
Drosophila larve øyet (også kalt Bowlig Organ, BO), er det viktigste organ for lys oppfatning. Hvert øye er sammensatt av 12 fotoreseptorer (PR), åtte PRS uttrykke den grønne-sensitive rhodopsin6 (rh6) og fire PRS uttrykke den blå-sensitive rhodopsin5 (RH5) 2,3. I tillegg til PRS, also klasse IV multidendritic nevroner, som dekker larve kroppen veggen, har blitt identifisert til å reagere på skadelige lysintensitet 4,5. Det er også kjent at pacemaker nevroner som ligger i den sentrale larve hjerne uttrykker den lysfølsomme proteinet Cryptochrome (Cry) som virker som klokke iboende blå lys-sensor i hjernen 6,7. Forbløffende photophobicity av vill type dyr viser en circadian komponent ved ulike tidspunkt i løpet av dagen og natten når du tester med denne analysen. Svar på bakgrunn av beite L3 larve viste sterkere photophobicity ved daggry og lavere photophobicity i skumringen når testet for lys-mørke preferanse 7. Interessant bare RH5-PRS er nødvendig for lys unngåelse, mens rh6-PRS er unnværlig. Både RH5-PRS og rh6-PRS er involvert i å tilbakestille molekylær klokke med lys 8. The Cry veien skal koordineres med de andre lys-sensing veier å orkestrere en passende behavioral utgang iløpet av dagen. Acetylkolin i PRS spiller en vesentlig rolle i lys unnvikelsesatferd samt innblanding av molekylære klokke. Blokkering acetylkolin neurotransmission fra PRS til døgnrytmen pacemaker nevroner reduserer photophobic respons i lys-mørke preferanse analysen åtte. Ved å anvende den samme analysen, har to symmetriske par av nevroner nylig blitt identifisert for å slå på lyset preferanse for den tredje instar larver av Drosophila 9.. Disse to parene av nerveceller kan fungere under sene larvestadier, da dyrene forlater maten antagelig finne en passende pupariation nettstedet. Imidlertid gjenstår spørsmålet om hvordan de visuelle trasé samhandle og kontrollere larve visuell atferd i en circadian måte i stor grad ubesvart. Lyset preferanse analysen gjør sammenligninger mellom døgnrytmen tidspunkter, fly linjer og biologiske tilstand under forskjellige lys kvaliteter. Analysen fremstilles lett og billig og har vært nyttig tidligere jegn flere laboratorier for å beskrive og studere lys avledet atferd i larve.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Larve Rearing
- Hold fly stammer eller genetiske krysninger i massekultur ved 25 ° C på maismel medium under en 12-timers lys-12-timers mørk syklus i en fly inkubator utstyrt med lys og tidsur.
- Fortynn Backer gjær i vann for å danne en tynn pasta (10 g Backer gjær fortynnes med 3-4 ml destillert H2O). Legg en liten dråpe til korn måltid mat og dekke hetteglass. La tørke i minst en time for å unngå voksne fluer stikker til gjær lime. Å sette en liten dråpe av gjær fortynnet i vann på overflaten av maten kan forbedre oviposition. Alternativt baker gjær lim, 20% eddiksyre (AcOH) (Sigma Aldrich, Sveits A6283-100 ml) kan brukes. For dette, dyppe en Q-tip på løsningen og spredt på korn måltid mat overflate.
- Sett voksne fluer (minst fire dager gamle, men ikke eldre enn ti dager) i korn måltid mat hetteglass. Satt nok voksne i hvert hetteglass for å oppnå tilstrekkelig larver å gjenta preferanseteste flere ganger, og la statistisk sammenligning. For genetiske kors, vi bruker vanligvis et minimum av 20 kvinner og 5-10 hanner per hetteglass, men noen linjer krever flere kvinner til å skaffe et tilstrekkelig larve avkom.
- La voksne legger egg i 12 timer og overføre dem til nye pakningene. Voksne kan overføres på morgenen og kvelden. Vi pleier å overføre voksne i syv til ti dager, og hvis nødvendig ta nye voksne.
- Hold eggsamlingar tatt hver 12. time i inkubatoren og la vokse larvene ved 25 ° C, 12-timers lys-12-timers mørk syklus og 60% luftfuktighet. For å teste for biologiske komponenter av visuell atferd flytte larver til konstant mørke (DD) 48 timer etter egg samling (tilsvarende to-light-mørke sykluser). Til dette bruker en egen inkubator uten lys, men beholde alle andre forhold som temperatur og fuktighet identiske. Pass på å overføre hetteglass til DD inkubator like før overgangen til den mørke fasen. Før du flytter ampullene til anotheh inkubator sette hetteglass i en pappeske eller pakk ampullene med aluminiumsfolie for å unngå lyseksponering under overføringen (pakking i pappeske eller innpakning må gjøres under "lys-on fase" før overgangen mellom inkubatorer). Hindre dyrene fra alle lyseksponering etter dette punktet og frem eksperimenter start.
- Etter fire dager (84-108 hr fra egglegging) samle tidlig L3 (fôring larver) på tidspunkter som skal testes (se fire. Lett preferanse test, punkt. 4.4.).
2. Test Setup
- Utføre eksperimenter i et mørkt rom med konstant temperatur-og fuktighetsforhold.
- For å holde to kvadrantene av petriskål i mørket, dekk lokket med svart tape og aluminiumsfolie. For å gjøre dette, markerer midten av lokket omkrets. Også markere fire poeng på grensen av lokket med 90 ° av separasjon mellom dem. For å gjøre det enklere, tegne en 20 cm firkantet delt i fire kvadranter med 10 cm lengde på enark, eller med hjelp av en datamaskin. Klipp 10 cm kvadrater av aluminiumsfolie og svart tape (figur 1A). Dekke to motsatte kvadranter ved å lime et kvadrat av aluminiumsfolie, som første lag og svart tape som dekker det, være nøye med å også dekke grensen av lokket.
I det siste to litt forskjellige former av dette assay ble brukt. Vi her bruke "kvart-plate"-analysen, hvor petriskål er delt i fire like fjerdedeler 10. I den alternative "halv-plate"-analysen petriskålen er delt halvdel (halv utsatt for lys, halvparten i mørke) 1,7,8. Frem til i dag ingen signifikante forskjeller mellom de to analysene har blitt publisert. - Lim en kvadrant ark slik som den som brukes til merking av lokkene rett under lyskilden på bordet. Mark omkretsen av en petriskål sentrert på kvadrantene skjæringspunktet. Bruk merkene som referanse for å plassere testplaten alltid i den samme posisjon under lyskilden.
- Installere enlampe, enten en enkel hvit lyspære (Phillips, Softtone 5W) eller en LED-lampe (LED lampe, 80012 White, Osram) over petriskål med hjelp av et strykejern støttefot (Fisher Scientific, S47808). Juster høyde på en slik måte at hele testplaten er homogent belyst. Vi anbefaler på det sterkeste bruk av LED-lamper siden de avgir mer spesifikke bølgelengder enn konvensjonelle lyspærer. Videre LED avgir mindre varme.
- Juster lysintensiteten med hjelp av et fotometer (Environment Meter PCE EM882). For å oppnå den nødvendige lysintensitet på 350-760 lux, flytte lampen opp eller ned etter behov. Koble lampen til en justerbar strømforsyning gir mer fleksibilitet til å endre intensitet uten å flytte lampen (figur 1B).
3. Plater Forberedelse
- Gjør 200 ml 2,5% agar (Sigma-Aldrich, Sveits A5093-500G) med dobbel destillert vann (Millipore).
- Plasser petriskåler på et bord (90-mm diameter;Greiner Bio-One GmbH, til 4550 Kremsmeinster, Østerrike) i rader tillate helle varmt agarose.
- Kok agarose i en mikrobølgeovn inntil oppløsningen er fullstendig transparent og væske. Sørg for at væske løsningen ikke inneholder bobler. FORSIKTIG: Transport nøye til bordet siden løsningen kan være veldig varmt!
- Hell varm agarose inn i petriskåler inntil hele overflaten er dekket homogent med et tynt lag av oppløsningen, om to eller tre millimeter er tilstrekkelig. Vær rask for å hindre agarose stivner før belegg alle platene. La platene avkjøles. Oppbevar platene ved romtemperatur og bare benyttes på samme dag av preparatet.
4. Lett preferanse Test
- Arbeide under rødt lys betingelser i forsøket rom for å hindre at lysvirkningen før testen siden Drosophila er ikke i stand til å oppfatte røde bølgelengder av lys. Bruk en rød lyspære (Phillips, PFE712E * 8) montert i en lampe for å lyse tHan legger til arbeid.
- Opprettholde temperaturen gjennom alle eksperimenter ved 25 ° C. Kontroll romtemperatur ved hjelp av et varmeelement eller kjøling enhet ved behov.
- Ta litt mat fra ampullene oppdratt for to-dagers sykluser under konstant mørke (fra pkt. 1). Siden larvene blir vanligvis graving på overflaten av maten, kan det øverste lag (ca. 5 mm dype) med hjelp av en spatel (Fisher Scientific, 14-373-25A). Spre maten på yttersiden av en petriskål lokket, tilsett litt vann og bland forsiktig med slikkepott.
- Samle fôring L3 larver fra maten. Som lys preferanser vil bli testet, velge bare tidlig / fôring L3 larvene er avgjørende ettersom det negative phototaxis er sikret. Sent / vandrende L3 larver eller stor larve krypende på mat formodentlig allerede slått sin photobehavior. Fôring L3 larver (negativ phototactic) kan gjenkjennes fordi deres fremre spiracles er åpne og stakk på utsiden i en finger-lignende form. Den bakre Spiracles har tre åpninger hver, og fire grupper av store forgrenet hår. Spyttkjertlene strekker seg til den andre abdominale segmentet 11.. Staging larve under et mikroskop er praktisk mens ingen hvitt lys bør brukes. Et rødt lys lampe er nødvendig for å belyse larvene hvis iscenesettelse henhold stereoskopisk mikroskop før forsøkene er nødvendig.
- Vask larver kort i vann og samle tidlig fôring tredje instar larver (fortsatt i rødt lys). Før du overfører larvene til test plate, ta larvene med en våt pensel og nøye absorbere overflødig vann med et papirhåndkle eller filter papir. Ikke tørk larver altfor overdrevet siden det kan skade dyr og påvirke dens atferd.
- Bruke våt pensel nøye overføre larvene til platene. Plasser en gruppe på omtrent 30 larver i sentrum av platen. Dekk platen med lokket allerede forberedt med kvadranter og sette platen under lyskilden klar for eksperimentet (se seksjon 2).
- Slå på hvitt lys lampe og starte tidtakeren. Let larven bevege seg fritt på platen i 5 min, deretter raskt fjerne lokket og telle antall larver i mørke og i lys kvadranter. Merking posisjonen til hver larve med en markør kan lette telling. Alternativt kan du ta et bilde av platen og telle en posteriori. Larver viser uklart lys preferanse, som larvene krypende på veggene eller gravende inn agar bør vurderes som nøytralt preferanse og bare tas med i det totale antallet larver når lyset preferanse indeksen er beregnet.
- Etter telling, kast platen med larver og erstatte med en ny test plate for neste eksperiment. Samle brukte platene i en autoklav plastpose for senere håndtering og avhending.
- Når du har utført et tilstrekkelig antall forsøk en ny genotype kan testes. 10-15 forsøk pr genotype er tilstrekkelig for analyse.
5. Data Analysis
- For enkelhets overføre dataene til et dataark som Excel (Microsoft) eller Origin (Opprinnelse Lab) på en datamaskin for videre statistisk analyse. Ordne på en kolonne av antall dyr i mørket, i en andre kolonne antall dyr i lyse kvadranter og i det tredje totalen av dyr i platen (inklusive "nøytral" larver).
- Beregn preferanse indeks (PREF) for mørket for hvert eksperiment ved hjelp av følgende formel:
PREF (mørke) = (antall larver i mørket - antall larver i lys) / totalt antall larver - Sammenlign statistisk et sett med data med en egnet analyse for grupper. Her bruker vi en Wilcoxon test for å sammenligne statistisk to grupper. En ANOVA test med en Tukey multippel-sammenligning post hoc test kan gjøres, dersom normal distribusjon forutsetningen er oppfylt i en manifold gruppe sammenligning.
- Lage grafer som viser tydelig sammenligninger mellom linjer og tidspunkter langs dagers syklus. We bruk Origin programvare (Origin Lab) for å teste statistisk signifikans og generere nødvendige grafer, men noen annen statistisk programvare kan være nyttig.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Etter protokollen beskrevet ovenfor, testet vi lys-mørke preferanse tidlig i tredje larve stadium av villtype Canton-S flyr på to ulike biologiske ganger Ct0 og CT12. Voksne ble oppdratt 12-timers light-12-timers mørke og venstre for å legge egg i 12 timer. Larvene vokser de to første dagene under samme lys-mørke regimet. Siden vi ønsket å teste circadian modulasjon under konstante forhold (gratis kjøring av biologiske klokke), ble larvene deretter overført til konstant mørke for de neste tre dagene før testen ble utført (figur 3A).
Her brukte vi 350 lux siden det har vist seg at dette er den optimale lysstyrken til å oppdage forskjeller i lys respons av Drosophila larve langs circadian syklus i forhold til andre intensiteter (70 og 600 lux) 7. Forskjeller i lysfølsomhet, og derfor i lys respons er observert når man sammenligner CT0 med CT12. I Drosophila, CT0 sammenfallendes med daggry, er halve syklusen mellom CT0-CT12 betraktet den subjektive dag og fra CT12 til CT24 den subjektive natt 12. Lett fotosensitivitet er høyere kort etter overgangen fra mørke til lys, når nesten 77% av larvene foretrekker mørket sammenlignet med nesten 69% av mørk preferanse på et tidlig subjektive natt (Figur 3B). Dette gjenspeiles også i den mørke preferanse indeks (PREF (mørke)) beregnet med formelen presentert ovenfor for hvert forsøk. Gjennomsnitt alle repetisjoner vi fått en preferanse indeks på 0,52 for CT0 og 0,36 for CT12. Bruke Wilcoxon test (Origin) en statistisk signifikant forskjell mellom to tidspunkter vises (p = 0,0229).
Figur 1. (A) Merking kvadranter i petriskål lokk. Kvadranter kan merkes i petriskål lokket med hjelp av en trykt kvadrant brukt som lerret. Baktil det første lag av aluminium-folie kan limes på den ytre flate av platen og dekkes med sort bånd i de to motsatte kvadranter for mørke. (B) Skjematisk satt opp for den lys-mørke-preferanse-test. (C) En Petri tallerken dekket med mørke kvadranter og fylt med 2,5% agar, klar til å bli brukt til eksperimenter. Klikk her for å se større figur .
Figur 2. Lett-dark preferanse test, eksempel på en tallerken rett etter innstilling larve på test plate (Start) og etter 5 min (End). Vanligvis bruker vi en gruppe på 30 dyr for hvert forsøk.
tp_upload/50237/50237fig3.jpg "alt =" Figur 3 "fo: content-width =" 5.5in "fo-src =" / files/ftp_upload/50237/50237fig3highres.jpg "/>
Figur 3. (A) Light regime følges for å teste lys preferanse i fôring L3 larve. (B) Prosent av mørk preferanse for både tid peker testet (CT0 og CT12). Prosentandel av larve som foretrukket mørke og lys telles for hver repetisjon og alle repetisjoner gjennomsnitt. Larver i grensene av plate eller graving på agar blir betraktet som nøytral. (C) Mørk preferanse indeks beregnet for de samme tidspunkter. Statistisk signifikant forskjell mellom gruppene er vist ved Wilcoxon sum-rank test (p <0,05). (N = 18 (540 larver) per tidspunkt). Klikk her for å se større figur .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Lyset preferanse testen beskrevet utnyttet larve medfødt photobehavior. Analysen er enkel å etablere, gjør at mange repetisjoner til lave kostnader og leverer verdifull informasjon om lys sensing og behandling. Den eksperimentelle paradigmet gir relativt rask kvantifisering av hvor mange individer foretrekker lys eller mørk. Slike preferanser kan vises som grove prosenter eller alternativt som preferanse Index (PREF). Den PREF er uttrykt som differansen av dyr som foretrukne lys og dyr som foretrukket mørke dividert med det totale av dyr.
Et viktig punkt for den lette preferanse testen er varigheten av forsøkene. Her har vi testet fem minutter, men det er mulig at andre genotyper eller de under andre lette kvaliteter forskjellene er ikke så klart ved hjelp av dette eksperimentet varighet. For visse stimuli (gustatory) har vi innsett at lengre eksperimenter, med 20 min varighet, levere renere preferanserCES med mindre variasjon. Teste ulike eksperimentelle varigheter kan være rettferdig spesielt når du bruker genotyper der bevegelse eller følsomhet påvirkes og larver krever lengre tid til å utforske testing plate. I så fall bør tiden være like justert for kontroller og eksperimentelle genotyper.
Analysen kan også påvise forskjeller mellom tidspunkter av dagen gjennom circadian syklus som vist her og i tidligere rapporter 7,13. Lette svar på photic stimuli er sterkt regulert av biologiske klokke, antagelig ved å modulere følsomheten fotoreseptorer. Larve respons til lys nedgang i løpet av de to første timene av dagen og bli stabil gjennom de resterende ti timer med lys fase. For å sammenligne forskjellige grupper i løpet av dagen, er det viktig å gjøre eksperimenter ved tilsvarende eller identiske tidspunkter av den biologiske syklus for hver gruppe. I tillegg er det også viktig å unngå endringer somkan påvirke larvenes atferd, som termiske svingninger eller lette innganger tidligere eksperimenter hvis arbeider i mørket. For dette, er det viktig å bakre larvene ved den samme temperatur og fuktighet enn de som brukes for eksperimentering og være forsiktig ved dyrehold i mørket når det er nødvendig.
Minst tre nylig beskrevet trasé bidra til lys sensing i Drosophila larve 5,14: 1) rhodopsin avhengige system mediert av larvenes øyet, 2) de multidendritic nevroner klasse IV, spredt langs larve kropp og 3) klokke iboende blå lyssensorer uttrykke Cry. Bidrag av forskjellige lys-sensing trasé for visuell atferd kan løses ved preferanse testen beskrevet her. Ulike kilder til belysning med spesifikke intensiteter og bølgelengder kan brukes til å teste forskjellige lys kvaliteter. Denne muligheten kan avhenge av detaljer om følsomheten av enkelte elementer i lys følersystem end hvor det lys-innganger blir behandlet. For en mer detaljert eksperimentering i forhold til lys stimulering, kan analysen enkelt endres til å teste forskjellige lys kvaliteter. Økende og minkende lysintensitet, samt teste ulike bølgelengder av lys er mulig ved hjelp av selvlagde LED-lamper med bestemte bølgelengder (mange muligheter er tilgjengelige i markedet). Kontroll av slike lamper med strømforsyninger tilbyr et godt utvalg av intensiteter. Disse muligheter for manipulering av lette kvaliteter gir en rekke variabler som skal undersøkes med lyset preferanse test.
Videre Drosophila larver er i stand til å knytte straff eller belønning med enten lys eller mørke, endre sitt opprinnelige photobehavior 15. For dette ble en tilpasning av protokollen beskrevet ansatt som viser allsidigheten av analysen. Oppsummert er lys-mørke preferanse test et verdifullt instrument bidra med en bedre forståelse av raskog biologiske atferd som stammer fra lette stimuli og hvilke elementer av den lysfølsomme systemet og den biologiske klokken i Drosophila larve er involvert i denne prosessen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noe å avsløre.
Acknowledgments
Vi takker våre kolleger ved Institutt for biologi, Universitetet i Fribourg for fruktbare diskusjoner. Vi takker Bloomington Stock Center for å gi fly aksjer. Dette arbeidet ble støttet av den sveitsiske National Science Foundation (PP00P3_123339) og Velux Foundation til SGS
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Agar | Sigma-Aldrich | A5093-500G | 2.5%; Sigma-Aldrich, 9471 Buchs, Switzerland |
| Petri dishes | Greiner Bio-One GmbH | 633180 | 90-mm diameter; Greiner Bio-One GmbH, 4550 Kremsmeinster, Austria |
| LEDs Lamp | OSARAM | 80012 White | LED lamp, 80012 White |
| Environment Meter | PCE | PCE EM882 | Lux, Temp, RH% |
| Thermostatic cabinet | Aqua Lytic (Liebherr) | ET636-6 | |
| Light timer | Timer T | 6185.104 | 230V/50HZ (check specifications for your country) |
| Universal thermostat | Conrad | UT200 | |
| Humidifier | Boneco | ||
| Balck tape | Tesa | 5 cm | |
| Glue | Uhu | ||
| lncubator lamp | Phillips | Softtone | 5W |
| Timer clock | Ziliss | Ziliss, Switzerland | |
| Excel Software | Microsoft | Excel | |
| Origin Software 8.5 | OriginLab | ||
| Backer Yeast | Migros Switzerland | ||
| Iron support stand 17X28CM | Fisher Scientific | S47808 | |
| Acetic acid | Sigma Aldrich | A6283-100ML | 20% acetic acid dilluted in H2O |
| Red light lamp | Phillips | PFE712E*8C | |
| Spatula | Fisher Scientific | 14-373-25A | |
| Power supply | EA | EA PS 2042-06B | Optional |
| Aluminium foil | Prix Coop | ||
| Heater | GOON | NSB200C | |
| Microwave Oven | Intertronic | ||
| Standard corn meal fly food | |||
| Destilled water |
References
- Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development. J. Neurogenet. 10, 119-135 (1995).
- Sprecher, S. G., Pichaud, F., Desplan, C. Adult and larval photoreceptors use different mechanisms to specify the same Rhodopsin fates. Genes Dev. 21, 2182-2195 (2007).
- Sprecher, S. G., Desplan, C. Switch of rhodopsin expression in terminally differentiated Drosophila sensory neurons. Nature. 454, 533-537 (2008).
- Xiang, Y., et al. Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall. Nature. 468, 921-926 (2010).
- Diaz, N. N., Sprecher, S. G.
- Emery, P., et al. Drosophila CRY is a deep brain circadian photoreceptor. Neuron. 26, 493-504 (2000).
- Mazzoni, E. O., Desplan, C., Blau, J. Circadian pacemaker neurons transmit and modulate visual information to control a rapid behavioral response. Neuron. 45, 293-300 (2005).
- Keene, A. C., et al. Distinct visual pathways mediate Drosophila larval light avoidance and circadian clock entrainment. J. Neurosci. 31, 6527-6534 (2011).
- Gong, Z. F., et al. Two Pairs of Neurons in the Central Brain Control Drosophila Innate Light Preference. Science. 330, 499-502 (2010).
- Lilly, M., Carlson, J. smellblind: a gene required for Drosophila olfaction. Genetics. 124, 293-302 (1990).
- Bodenstein, D. The postembryonic development of Drosophila. Biology of Drosophila. Demerec, M. , John Wiley & Sons. 275-367 (1950).
- Pittendrigh, C. S. Circadian systems: Entrainment. Biological Rhythms. 4 Handbook of Behavioral Neurobiology, Plenum. 95-124 (1981).
- Collins, B., Kane, E. A., Reeves, D. C., Akabas, M. H., Blau, J. Balance of Activity between LN(v)s and Glutamatergic Dorsal Clock Neurons Promotes Robust Circadian Rhythms in Drosophila. Neuron. 74, 706-718 (2012).
- Keene, A. C., Sprecher, S. G. Seeing the light: photobehavior in fruit fly larvae. Trends Neurosci. 35, 104-110 (2012).
- von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae. Behav. Neurosci. 125, 921-929 (2011).
